Rosa del Bengala È un test di laboratorio basato su una reazione antigene-anticorpo per la diagnosi di brucellosi. La tecnica consente la rilevazione di anticorpi specifici contro i batteri Brucella abortus in campioni di siero umano. Il risultato può essere riportato qualitativamente o semiquantitativamente.
La forma qualitativa esprime se il paziente è positivo o negativo per il test, cioè se ci sono o meno anticorpi. Nel frattempo, il rapporto semiquantitativo è riportato in UI / ml e indica la quantità approssimativa di anticorpi presenti. Va notato che gli anticorpi verranno prodotti solo se il paziente è stato in contatto con il microrganismo.
Per la sua grande semplicità, elevata sensibilità e specificità, è una delle tecniche di sieroagglutinazione più utilizzate in medicina come test iniziale per la diagnosi di questa malattia..
Alcuni ricercatori hanno confrontato l'efficacia del test Rose Bengal con altre tecniche, come la seroagglutinazione (antigeni febbrili) e hanno osservato che sebbene vi sia una buona correlazione, hanno visto casi isolati in cui il test dell'antigene febbrile era negativo e Rose de Positive flare.
La differenza ottenuta era dovuta al fatto che questi pazienti avevano una sottoclasse di anticorpi IgG contro Brucella abortus con migliore capacità legante a pH acido, quindi potrebbero reagire con il reagente Rosa Bengala ma non con quello degli antigeni febbrili.
In questo senso, hanno suggerito di modificare i reagenti della tecnica dell'antigene febbrile a un pH acido in modo che possano rilevare questo tipo di casi..
Indice articolo
Il Rose Bengal Reagent è costituito da una sospensione antigenica. È costituito dal ceppo S99 di Brucella abortus, diluito in un tampone lattato acido (pH 3,6), più fenolo e colorante Rose Bengal.
Pertanto, nel campione si cercano anticorpi anti-Brucella, se presenti reagiranno con l'antigene reagente e si osserverà una reazione di agglutinazione macroscopicamente visibile. Il test rileva gli anticorpi IgM o gli anticorpi IgG.
Ciò significa che può rilevare la malattia sia nella sua fase acuta in cui prevalgono gli anticorpi IgM sia nella sua fase cronica in cui predominano gli anticorpi IgG..
Questo rappresenta un vantaggio poiché aumenta la sensibilità del test ma allo stesso tempo è uno svantaggio poiché non discrimina tra uno stadio e l'altro, perché la reazione con gli anticorpi IgM e IgG è identica.
Il test deve essere sempre eseguito insieme a un controllo negativo e un controllo positivo. Il controllo negativo contiene siero animale senza anticorpi e il controllo positivo contiene siero di origine animale con 50 UI / ml di anticorpi anti-Brucella..
La brucellosi è una malattia grave che tende ad essere cronica e pericolosa, quindi è molto importante che venga diagnosticata precocemente. È una zoonosi e gli esseri umani possono essere infettati dal contatto diretto con materiale contaminato, le persone più vulnerabili sono veterinari e detentori di animali.
L'infezione può verificarsi anche consumando carni crude infette, tra le altre forme di contagio.
Questa malattia attacca a livello locale o sistemico. La forma sistemica è la più grave, poiché possono essere colpiti vari organi, tra cui il sistema endoteliale del reticolo (fegato, milza, midollo osseo), la pelle (cellulite e linfoadenopatia), il sistema respiratorio (polmonite), il sistema muscolo-scheletrico (artrite, sacroileite e spondilite ), tra gli altri.
Il test Rose Bengal è una tecnica molto utile per effettuare uno screening iniziale, perché è molto economico, di facile utilizzo e con grande specificità e sensibilità..
I casi di falsi negativi e falsi positivi sono molto rari e possono verificarsi in persone con titoli anticorpali molto bassi (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 UI / ml) rispettivamente.
-Kit Rose Bengala
-Piastra di agglutinazione sfondo bianco
-Pipetta da 50 µl
-Rotatore (opzionale)
-Vortice
I kit commerciali Rose Bengal sono forniti con reagenti pronti per l'uso.
-Temperare i reagenti prima di iniziare il lavoro.
-Le piastre di agglutinazione hanno cerchi disegnati, ciascuno per un campione diverso. Utilizzare 3 cerchi, il primo per il controllo negativo, il secondo per il campione e il terzo per il controllo positivo.
-Posizionare una goccia o 50 µl dei controlli e del campione nel cerchio corrispondente.
-Mescolare il reagente rosa bengala utilizzando un vortice. Posizionare una goccia accanto a quelle precedentemente posizionate.
-Mescolare con stuzzicadenti di legno (usarne uno per ogni campione o controllo). Fai movimenti circolari e allarga in modo tale da coprire l'intero cerchio.
-Posizionare la piastra su un rotatore automatico da 80 a 100 giri / min o ruotare manualmente per 4 minuti. Leggi la prova alla fine di questo periodo.
-Verificare che i controlli abbiano dato come previsto. Confrontare la reazione del campione di prova con i controlli. Segnalare come positivo se si osserva agglutinazione e come negativo se non c'è agglutinazione.
Un test positivo indica che il paziente ha una quantità pari o superiore a 25 UI / ml di anticorpi anti-Brucella.
Se nella reazione qualitativa il campione è fortemente positivo, può essere semi-quantificato. Per questo vengono effettuate doppie diluizioni seriali del campione con soluzione salina fisiologica. La procedura sopra descritta viene eseguita ad ogni diluizione..
Viene anche interpretato osservando l'agglutinazione macroscopicamente. Il risultato sarà il titolo della diluizione più alta in cui è stato osservato un risultato positivo.
Per calcolare il valore approssimativo degli anticorpi anti-Brucella, viene utilizzata la seguente formula:
25 UI / ml x titolo di reazione = UI / ml
Esempio, se un paziente nel test semiquantitativo risulta positivo alla diluizione ½, ¼ e 1/8 e inizia a essere negativo dalla diluizione 1/16 in poi, significa che il paziente ha un titolo di 8.
Applicando la formula:
25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml
-I kit hanno una data di scadenza e deve essere rispettata. Non deve essere utilizzato se il reagente è scaduto.
-Durante l'uso, assicurarsi che il reagente non contenga particelle solide, poiché questo è un segno di deterioramento..
-Conservare tra 2 e 8 ° C.
-Non congelare, questo atto danneggia irreparabilmente il reagente.
-Eseguire sempre il test insieme ai controlli negativo e positivo.
-La tecnica tollera campioni di siero con un certo grado di lipemia ed emolisi, tuttavia non è consigliabile utilizzare sieri esageratamente lipemici ed emolizzati, entrambe le condizioni alterano i risultati del test..
-Riscaldare sempre i reagenti a temperatura ambiente prima di iniziare l'analisi..
-Non interpretare reazioni che durano più del tempo consigliato, in quanto questo genera la segnalazione di falsi positivi, poiché dopo un certo tempo il reagente precipita, simulando una reazione positiva.
-La tecnica è sensibile al 100% e ha una specificità del 98%.
-Dopo una semi-quantificazione di 1000 UI / ml c'è la possibilità di osservare un effetto prozona (falso negativo per eccesso di anticorpo rispetto alla quantità di antigeni).
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