Il Agar Baird Parker È un terreno di coltura solido, selettivo e differenziale. È stato creato nel 1962 per il rilevamento e il conteggio degli stafilococchi coagulasi positivi (Staphylococcus aureus).
È composto da idrolizzato di caseina pancreatica, estratto di carne, estratto di lievito, cloruro di litio, glicina, piruvato di sodio, tellurito di potassio, agar e emulsione di tuorlo d'uovo..
Baird Parker Agar si basa sulla capacità del S. aureus per ridurre la tellurite e produrre lecitinasi. Entrambe le proprietà generano una colonia con caratteristiche specifiche per questa specie. Pertanto, è altamente efficace nel rilevare questo microrganismo..
Le tipiche colonie di S. aureus Sono neri o grigio scuro, con un bordo incolore e un alone chiaro che li circonda, differenziandoli da altri microrganismi. Questo patogeno può essere trovato in campioni clinici, acque, cosmetici e cibi crudi o cotti..
La sua diagnosi o rilevazione è della massima importanza, a causa della varietà di patologie che produce, come intossicazione alimentare, sindrome della pelle ustionata, sindrome da shock tossico, ascessi, meningite, setticemia, endocardite, tra gli altri..
Indice articolo
L'idrolizzato di caseina pancreatica, l'estratto di carne e l'estratto di lievito sono le fonti di nutrienti, vitamine e minerali necessari per lo sviluppo microbico generale, mentre il piruvato e la glicina sono composti che promuovono la crescita specifica di Staphylococcus aureus.
Baird Parker Agar è selettivo perché contiene sostanze che inibiscono la crescita della flora di accompagnamento, promuovendo nel contempo lo sviluppo di S. aureus. I composti inibitori sono il cloruro di litio e il tellurito di potassio..
Questo mezzo consente di differenziare S. aureus del resto degli stafilococchi coagulasi negativi. S. aureus ha la capacità di ridurre la tellurite in tellurio nero metallico libero, formando colonie nere o grigio scuro.
Allo stesso modo, il tuorlo d'uovo fornisce i substrati per dimostrare la presenza dell'enzima lecitinasi e lipasi.. S. aureus è lecitinasi positivo e quindi si osserverà un alone chiaro intorno alla colonia, indicando che la lecitina è stata idrolizzata.
In questo senso, l'aspetto su questo agar di colonie nero lucido o grigio scuro con un alone chiaro intorno indica la presenza di S. aureus.
Se si forma una zona di precipitazione, è indicativa dell'attività della lipasi. Alcuni ceppi di S. aureus sono lipasi positivi e altri negativi.
Nel caso in cui il file S. aureus Se la lipasi è positiva, si osserverà un'area opaca intorno alla colonia nera o grigio scuro e quindi un alone chiaro dovuto all'azione della lecitinasi.
Colonie di batteri diversi da S. aureus in grado di crescere in questo terreno svilupperà colonie incolori o marroni, senza alone circostante.
Colonie nere atipiche possono anche essere viste con o senza un bordo incolore, ma senza un alone chiaro. Queste colonie non dovrebbero essere prese in considerazione, non corrispondono S. aureus.
Prendi un uovo di gallina fresco, lavalo bene e mettilo in alcool al 70% per 2 o 3 ore. L'uovo viene quindi aperto in modo asettico e l'albume viene accuratamente separato dal tuorlo. Successivamente si prendono 50 ml di tuorlo e si mescolano con 50 ml di soluzione fisiologica sterile..
Alcune case commerciali vendono tellurite di potassio all'1% pronto per l'uso. Viene aggiunto al terreno prima che il terreno si solidifichi.
Per preparare questa soluzione in laboratorio, si pesano 1,0 g di tellurite di potassio e si sciolgono in una parte di acqua. Successivamente, la quantità di acqua viene completata fino a raggiungere i 100 ml. La soluzione deve essere sterilizzata con il metodo di filtrazione.
Pesare 60 g di terreno disidratato e sciogliere in 940 ml di acqua distillata. Lascia riposare il composto per circa 5-10 minuti.
Applicare calore mescolando frequentemente il terreno per migliorare il processo di dissoluzione. Porta a ebollizione per un minuto. Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.
Lasciate riposare fino a raggiungere la temperatura di 45 ° C e aggiungete 50 ml di emulsione di tuorlo d'uovo e 10 ml di tellurite all'1%. Mescolare bene e versare 15-20 ml su piastre Petri sterili..
Lasciar solidificare, disporre capovolto in finte e conservare in frigorifero fino al momento dell'uso.
Il pH finale del terreno preparato deve essere 6,8 ± 0,2.
Prima di seminare un campione, attendere che la piastra raggiunga la temperatura ambiente. Seminare in piatti per striscia o semina in superficie con spatola Drigalski.
Il colore del terreno disidratato è marrone chiaro e il colore del terreno preparato è ambra chiaro.
I campioni clinici vengono seminati direttamente scaricando parte del materiale ad un'estremità della piastra, e da lì viene striato per esaurimento. Incubare per 24-48 ore a 35-37 ° C.
Pesare 10 g del campione alimentare e omogeneizzare in 90 ml di acqua peptonata allo 0,1%, da lì si preparano le diluizioni se necessario. Inoculare le piastre in triplicato con 0,3 ml delle soluzioni preparate e seminare in superficie con una spatola Drigalski. Incubare per 24-48 ore a 35-37 ° C.
Questa metodologia permette di contare le colonie tipiche ottenute ed è ideale in presenza di S. aureus superiore a 10 CFU per gr / ml di campione.
Se l'importo di S. aureus È piccolo o c'è molta flora accompagnatoria, si suggerisce di arricchire il campione in brodo di soia tripticasi con 10% di NaCl e 1% di piruvato di sodio. Ciò favorirà la crescita di S. aureus e inibirà lo sviluppo della flora accompagnatoria. Le provette torbide vengono seminate su agar Baird Parker..
In un sistema di filtrazione sotto vuoto sterilizzato, vengono filtrati 100 ml di acqua di studio e successivamente la membrana microporosa da 0,4 micron viene rimossa con una pinza sterile e posta su una piastra Baird Parker. Incubare per 24-48 ore a 35-37 ° C. Questa tecnica consente il conteggio di colonie tipiche di S. aureus.
I ceppi noti possono essere utilizzati per valutare la qualità di Baird Parker Agar, come Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus E se ne andò 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 o Proteus mirabilis ATCC 43071.
In caso di ceppi di S. aureus È noto che l'ATCC riduce la tellurite e sono lipasi e lecitinasi positivi. Pertanto, deve esserci uno sviluppo soddisfacente e crescere colonie convesse con un centro nero e un bordo incolore, con un alone opaco e un alone più esterno leggero..
Per la sua parte, S. epidermidis su questo terreno si prevede uno scarso sviluppo, con colonie da grigio-brunastre a nere, senza alone chiaro.
In modo da E. coli Y P. mirabilis ci si aspetta che sia totalmente o parzialmente inibito. In caso di crescita, si svilupperanno colonie marroni senza area opaca o alone chiaro.
-Il terreno non deve essere riscaldato dopo aver aggiunto la tellurite e il tuorlo d'uovo.
-La preparazione dell'emulsione di tuorlo d'uovo e la sua aggiunta nel mezzo è un passaggio molto vulnerabile alla contaminazione. Occorre fare attenzione.
-Se sono presenti colonie tipiche di S. aureus deve essere confermato montando un test della coagulasi su detto ceppo.
-Se ci sono risultati dubbi con la coagulasi, devono essere montati altri test di conferma.
-Fare attenzione a non confondere la presenza di colonie tipiche di S. aureus con colonie nere atipiche.
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