Fondotinta, preparazione e usi SIM medium

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Alexander Pearson

Il mezza SIM è un agar semisolido e differenziale, appositamente progettato per aiutare a identificare alcuni batteri, principalmente della famiglia delle Enterobacteriaceae. È composto da triptein, peptone, solfato di ferro, solfato di ammonio, tiosolfato di sodio e agar..

Questo mezzo consente l'esecuzione di tre importanti prove: la produzione di idrogeno solforato (H.DueS), formazione e motilità dell'indolo, da cui deriva l'acronimo SIM. Per la sua grande utilità non può mancare in un laboratorio di batteriologia.

A. Mezzo SIM commerciale B. Test SIM H2S (-), indolo (-) e motilità (+) e test SIM H2S (+), indolo (-), motilità (+). Fonte: A. Foto scattata dall'autore MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

A differenza di altri mezzi, deve essere semisolido affinché la capacità di movimento di alcuni batteri sia rilevabile. In questo senso, questo test funziona molto bene per le Enterobacteriaceae, ma non per i bastoncini Gram negativi non fermentanti, dove si preferisce utilizzare altri metodi, come la goccia sospesa..

Il mezzo SIM permette di distinguere alcune proprietà specifiche che caratterizzano alcuni batteri rispetto ad altri. Per esempio Escherichia coli si distingue per essere H.DueS (-), indolo (+) e motilità (+), mentre Proteus mirabilis è H.DueS (+), indolo (-), motilità (+).

Indice articolo

  • 1 Razionale
    • 1.1 Fonte di alimentazione
    • 1.2 Produzione di idrogeno solforato
    • 1.3 Formazione di indolo
    • 1.4 Motilità
  • 2 Preparazione
    • 2.1 SIM media
    • 2.2 Reattivo di Kovac
    • 2.3 Reattivo di Erlich
  • 3 usi
    • 3.1 Semina
  • 4 Controllo di qualità
  • 5 Limitazioni
  • 6 Riferimenti

Base

È un terreno di coltura considerato differenziale, perché il suo utilizzo distingue tra microrganismi in grado di produrre idrogeno solforato da quelli che non lo fanno; Evidenzia anche quelli che formano l'indolo dal triptofano da quelli che non lo formano, e infine differenzia i batteri mobili da quelli immobili..

Fonte di potere

Come ogni mezzo di coltura, ha elementi che forniscono i nutrienti necessari in modo che possano svilupparsi microrganismi non esigenti. Questi elementi sono rappresentati da peptoni e triptein.

Lo sviluppo del microrganismo nel terreno è essenziale per poter osservare la presenza o l'assenza delle caratteristiche che questo terreno valuta..

Produzione di idrogeno solforato

La lettera S della sigla SIM si riferisce alla produzione di idrogeno solforato (H.DueS). I batteri in grado di formare idrogeno solforato assorbiranno lo zolfo dal tiosolfato di sodio.

Una volta che l'HDueS -gas incolore-, reagisce con il sale di ferro presente nel mezzo formando solfuro ferroso, ben visibile (precipitato nero). I batteri che non formano H.DueSì, lascia la metà del colore originale (beige).

La presenza del precipitato nero può ostacolare l'interpretazione della motilità. Tuttavia, è noto che la maggior parte delle Enterobacteriaceae che producono H.DueS sono motilità positiva, come Salmonella, Proteus e Citrobacter. Inoltre, il precipitato nero che copre quasi tutto il mezzo, suggerisce una motilità positiva.

Formazione di indolo

La seconda lettera della sigla SIM è "I", che rappresenta la formazione dell'indolo.

In questo senso il triptein, oltre ad essere una fonte di nutrienti, svolge un'altra fondamentale funzione. Questo peptone è ricco di un amminoacido chiamato triptofano, quindi può mostrare i batteri che producono triptofanasi.

Questo enzima è responsabile della scissione dell'amminoacido triptofano, con la conseguente formazione di indolo (sostanza incolore), acido piruvico e ammonio.

Ecco perché, per dimostrare questa reazione, è necessario aggiungere una sostanza rivelatrice (il reagente di Ehrlich o il reagente di Kovac). O reagisce con l'indolo, formando una sostanza a forma di anello rosso-fucsia sulla superficie dell'agar. Se compare l'anello fucsia, il test dell'indolo viene interpretato come positivo.

I batteri che non possiedono questo enzima non formeranno l'anello ed è interpretato come un test dell'indolo negativo.

È importante notare che il test dell'indolo dovrebbe essere l'ultimo ad essere interpretato, poiché una volta aggiunto il reagente, il terreno diventa torbido, rendendo difficile la visualizzazione della motilità..

Motilità

Infine la lettera "M" della parola SIM significa motilità. Per poter valutare la motilità, questo terreno è strategicamente semisolido, poiché questa caratteristica è essenziale per poter osservare se c'è o meno movimento batterico. I batteri che hanno flagelli sono quelli che danno questo test positivo.

Un test positivo sarà evidente quando si osserva torbidità, sia nell'inoculo iniziale, sia intorno ad esso. Considerando che, i batteri non mobili si sviluppano solo nel percorso dell'inoculo iniziale.

Preparazione

SIM media

Pesare 30 g di terreno disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. La miscela viene lasciata riposare per 5 minuti e poi riscaldata fino all'ebollizione, mescolando frequentemente fino a completa dissoluzione..

Distribuire la miscela in provette con tappi di cotone e sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti. Rimuovere il portaprovette dall'autoclave e lasciare solidificare in posizione verticale, in modo che il terreno abbia la forma di un blocco.

Per la sua conservazione va conservato in frigorifero fino al momento del suo utilizzo. Il terreno preparato deve avere un pH finale di 7,3 ± 0,2.

Al momento dell'inoculo del terreno, deve essere a temperatura ambiente. Il colore centrale è il beige.

Il reagente di Kovac

Misura 150 ml di alcol amilico o isoamilico o butilico. (Usa uno dei tre menzionati).

Sciogliere 10 g di p-dimetilamminobenzaldeide. Quindi aggiungere lentamente 50 ml di acido cloridrico concentrato.

Il reagente pronto per l'uso è incolore o giallo chiaro. Va conservato in una bottiglia color ambra e conservato in frigorifero. Non utilizzare se assume un colore marrone scuro; ciò indica che è danneggiato. Questo reagente è preferito quando si tratta di Enterobacteriaceae.

Il reagente di Erlich

Pesare 2 g di p-dimetilamminobenzaldeide e scioglierli in 190 ml di alcol etilico assoluto e mescolare lentamente con 40 ml di acido cloridrico concentrato. Conserva il reagente di Kovac allo stesso modo. Il reagente di Ehrlich viene utilizzato maggiormente per i batteri non fermentanti e anaerobici.

Applicazioni

Il mezzo SIM è molto utilizzato nei laboratori di batteriologia. Ha il vantaggio che tre caratteristiche essenziali nell'identificazione delle Enterobacteriaceae possono essere osservate nella stessa provetta..

Seminato

Il modo corretto di seminare questo terreno è utilizzare l'ago, con il quale viene prelevata una porzione della colonia pura da studiare e inserita verticalmente al centro del terreno. Dovrebbe essere eseguito un singolo affondo. La puntura non deve raggiungere il fondo del tubo, la cosa corretta è coprire solo i due terzi della profondità.

Non è consigliabile ripetere l'inoculo, poiché ciò può portare a false interpretazioni della motilità positiva. Il terreno inoculato viene incubato in aerobiosi a 37 ° C per 24 ore..

Dopo il tempo, si osserva se c'era o meno produzione di H.DueSi legge la motilità. Infine, l'indolo viene rivelato, aggiungendo da 3 a 4 gocce del reagente di Ehrlich o Kovac, mescolare delicatamente e interpretare.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5a ed. Editoriale Panamericana S.A. Argentina.

QA

Come controllo di sterilità, una o due provette vengono incubate senza inoculazione in un forno a 37 ° C per 24 ore. Si prevede che dopo questo periodo non ci sarà crescita o cambiamento di colore.

Come controllo di qualità, possono essere utilizzati ceppi noti certificati, come: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

I risultati attesi sono: Escherichia coli HDueS motilità negativa, indole e positiva, Enterobacter aerogenes solo motilità positiva, Salmonella typhimurium HDueS e motilità positiva, con indolo negativo. Proteus vulgaris tutto positivo, intanto Klebsiella pneumoniae Y Shigella sonnei tutto negativo.

Limitazioni

-Alcuni ceppi di Morganella morganii, Tra gli altri ceppi, possono produrre un pigmento brunastro in questo terreno a causa della produzione di melanina, questo non deve essere confuso con il precipitato di solfuro ferroso. In professionisti inesperti, questa situazione può generare falsi positivi nell'interpretazione del test H.DueS.

-I batteri aerobici rigidi cresceranno solo sulla superficie del tubo, rendendo difficile l'interpretazione della motilità.

Riferimenti

  1. BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008, disponibile su: bd.com
  2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Disponibile su: sicurezza alimentare
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. Disponibile su: http://f-soria.es
  4. Brizuela-Lab Laboratory. SIM media. Disponibile su: .brizuela-lab.com
  5. Britannia Laboratories. SIM media. 2015, disponibile su: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5a ed. Editoriale Panamericana S.A. Argentina.

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