Il brodo di tioglicolato È un terreno di coltura arricchito con una consistenza fluida. È noto con l'acronimo FTM per il suo acronimo in inglese Fluid Thioglycollate Medium. È stato creato da Brewer e modificato nel 1944 da Vera, che ha aggiunto il peptone di caseina.
Questo terreno ha un basso potenziale di riduzione dell'ossidazione, quindi non è raccomandato per lo sviluppo di batteri aerobi stretti, ma è ideale per il recupero di batteri microaerofili aerobici facoltativi, anaerobici stretti e non impegnativi..
Le elevate prestazioni osservate con questo terreno nell'isolamento e nel recupero di un'ampia varietà di microrganismi, lo hanno reso accettato dalla Farmacopea degli Stati Uniti (USP), dall'Associazione Ufficiale dei Chimici Agricoli (AOAC) e dalla Farmacopea Europea (EP).
Queste organizzazioni lo raccomandano per i test di controllo della sterilità dei prodotti farmaceutici e per l'arricchimento di vari tipi di campioni..
Il cado tioglicolato è composto da estratto di lievito, digestato pancreatico di caseina, destrosio anidro, L-cistina, cloruro di sodio, tioglicolato di sodio, resazurina e agar in piccole quantità.
Esistono diverse versioni di questo terreno, tra cui: brodo tioglicolato con indicatore, brodo tioglicolato senza indicatore, brodo tioglicolato con indicatore arricchito con emina e vitamina K1, e brodo di tioglicolato di carbonato di calcio.
Va notato che la variante di brodo tioglicolato arricchito con emina e vitamina K serve a favorire la crescita di anaerobi esigenti, e la variante di brodo tioglicolato contenente carbonato di calcio è utile per contrastare gli acidi prodotti durante la crescita microbica..
Indice articolo
Il brodo di tioglicolato è considerato un terreno di arricchimento non selettivo in quanto consente la crescita della maggior parte dei batteri non esigenti. I requisiti nutrizionali sono forniti dall'estratto di lievito, dalla digestione pancreatica e dal glucosio.
D'altra parte, questo terreno, nonostante sia un brodo, contiene una piccola quantità di agar; Ciò significa che ha un basso potenziale di riduzione dell'ossidazione, dovuto al fatto che rallenta l'ingresso di ossigeno, in modo tale che l'ossigeno diminuisce man mano che si addentra nel tubo..
Questo è il motivo per cui questo terreno è ideale per lo sviluppo di batteri facoltativi aerobi, microaerofili e anaerobi stretti, questi ultimi 2 senza la necessità di incubare in queste condizioni. Lo stesso mezzo regola la quantità di ossigeno all'interno del mezzo, essendo assente sul fondo del tubo e in quantità sufficiente sulla superficie..
Allo stesso modo, il tioglicolato e la L-cistina agiscono come agenti riducenti, aiutando a prevenire l'accumulo di sostanze dannose per lo sviluppo batterico, come il perossido. Inoltre, questi composti contengono gruppi sulfidrilici (-SH-), neutralizzando gli effetti inibitori dei derivati del mercurio, degli arsenici, tra gli altri metalli pesanti..
Da parte sua, la resazurina è un indicatore della riduzione dell'ossido. Questa sostanza è incolore se ridotta e rosa se ossidata. Esistono varianti di brodo tioglicolato indicatore e non indicatore. Il suo utilizzo dipenderà dal tipo di campione e dalle preferenze del laboratorio..
Nel frattempo, il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico del brodo tioglicolato e l'uso del glucosio in forma anidra previene l'eccesso di umidità nel mezzo disidratato..
Pesare 29,75 g di terreno disidratato e sciogliere in 1 litro di acqua distillata. La miscela viene lasciata riposare per circa 5 minuti. Portare a una fonte di calore e agitare frequentemente fino a completa dissoluzione..
Versare il terreno in provette e autoclavare a 121 ° C per 15 minuti. Lasciar raffreddare prima dell'uso. Controllare l'inserto della casa commerciale per la sua conservazione. Alcuni consigliano di conservarli a temperatura ambiente in un luogo buio e altri in un frigorifero al riparo dalla luce.
Il pH del mezzo preparato è 7,1 ± 0,2.
Il colore del terreno disidratato è beige chiaro e il terreno preparato è ambra chiaro con una certa opalescenza..
Esistono mezzi commerciali che portano già emina e vitamina K.1, speciale per la coltivazione di anaerobi.
Se il terreno anaerobico arricchito non è disponibile, è possibile preparare il brodo tioglicolato di base. Per questo vengono aggiunti 10 mg di emina cloridrato e 1 mg di vitamina K.1 per ogni litro di terreno. Tuttavia, se si aggiunge sangue o siero al brodo di tioglicolato, non è necessaria l'aggiunta di emina o vitamina K..
È disponibile in commercio ed è preparato seguendo le istruzioni sull'inserto.
Questo ha la stessa composizione del tioglicollato di base, ma non contiene resazurina.
Pesare 30 g di terreno disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Il resto della preparazione è lo stesso descritto nel brodo tioglicolato con indicatore.
Il brodo di tioglicolato è utile per l'arricchimento dei campioni clinici, soprattutto quelli provenienti da siti sterili. È utile anche per campioni non clinici, come cosmetici, farmaci, ecc..
Per l'inoculazione di campioni liquidi (come CSF, liquido sinoviale, tra gli altri), i campioni vengono prima centrifugati e quindi vengono prelevate 2 gocce del sedimento e poste nel brodo tioglicolato. Incubare a 35 ° C per 24 ore. Se in questo tempo non c'è crescita (torbidità) incubare fino ad un massimo di 7 giorni.
Se il campione viene prelevato con un tampone, i terreni di coltura vengono prima inoculati in piastre e infine il tampone viene introdotto nel brodo, la porzione sporgente viene divisa e la provetta viene tappata, lasciando il tampone all'interno. Incubare a 35 ° C per 24 ore, 7 giorni al massimo.
Per i campioni solidi, omogeneizzare in soluzione salina fisiologica (SSF) e quindi inoculare il brodo di tioglicolato con 2 gocce della sospensione..
A volte può essere utilizzato come mezzo di trasporto per campioni in cui si sospetta la presenza di anaerobi stringenti o come brodo di arricchimento di riserva..
Il brodo tioglicolato variante con carbonato di calcio viene utilizzato per il mantenimento dei ceppi di controllo più a lungo, perché ha la capacità di neutralizzare gli acidi prodotti dall'utilizzo del glucosio; questi acidi sono tossici per alcuni batteri.
La crescita nel brodo tioglicolato sarà osservata dalla torbidità del terreno. Si consiglia di eseguire una colorazione Gram e successivamente una subcoltura in terreni non selettivi e selettivi, a seconda del tipo di campione e dei microrganismi sospettati..
Per il controllo della sterilità si consiglia di incubare uno o due brodi senza inoculazione. Il risultato atteso è un brodo limpido, senza viraggio di colore, anche se è normale vedere una leggera colorazione rosa sulla superficie della provetta..
Per il controllo di qualità, è necessario inoculare tra 10 e 100 CFU di ceppi di controllo certificati, ad esempio Staphylococcus aureus E se ne andò 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
Incubare a 30-35 ° C in aerobiosi per 24 ore fino a un massimo di 3 giorni, poiché questi microrganismi sono in rapida crescita.
Si prevede un buon sviluppo in tutti i casi, ad eccezione di Micrococcus luteus Y Bacillus subtilis, dove può esserci uno sviluppo moderato.
Per il controllo della qualità del brodo tioglicolato arricchito con emina e vitamina K.1, possono essere utilizzati ceppi di controllo Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 e Bacteroides fragilis ATCC 25285. Il risultato atteso è una crescita soddisfacente.
-A volte si vede che la superficie del brodo tioglicolato indicatore diventa rosa; Ciò è dovuto all'ossidazione del mezzo. Se il colore rosa copre il 30% o più del brodo totale, può essere riscaldato a bagnomaria per 5 minuti, raffreddato di nuovo e utilizzato..
Questo rimuoverà l'ossigeno assorbito, riportando il mezzo al suo colore originale. Questa procedura può essere eseguita una sola volta.
-Per migliorare la crescita dei batteri aerobici dovrebbe essere incubato con il tappo leggermente allentato. Tuttavia, è preferibile utilizzare a questo scopo un brodo per infusione cervello-cuore o brodo di soia tripticasi per il corretto sviluppo di aerobi stretti..
-Evitare il congelamento o il surriscaldamento del fluido, poiché entrambe le condizioni danneggiano il fluido..
-La luce diretta danneggia il terreno di coltura, deve essere conservato al riparo dalla luce.
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