Il brodo di selenite È un terreno di coltura liquido selettivo. È stato progettato da Leifson per l'arricchimento di campioni in cui si sospetta la presenza di batteri enteropatogeni del genere Salmonella..
Questo terreno è conforme ai requisiti dell'American Public Health Association (APHA) e pertanto è accettato per le indagini sulla presenza di Salmonella in campioni di feci, urina, alimenti liquidi o solidi, acqua, tra gli altri..
La sua composizione chimica favorisce il recupero di questi microrganismi ea sua volta inibisce la crescita di altri. È principalmente tossico per la maggior parte dei batteri appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae. Tuttavia, consente anche il recupero dei ceppi di Shigella e non inibisce la crescita di Pseudomonas e Proteus..
È composto da selenito di sodio idrogeno anidro, fosfato di sodio anidro, peptoni e lattosio. Esiste anche una variante a cui viene aggiunta la cistina, da cui il nome brodo selenite-cistina..
Attualmente si preferisce l'utilizzo di brodo selenite-cistina, in quanto si ottiene una percentuale di recupero di Salmonella maggiore, equivalente a quella osservata con altri terreni selettivi per lo stesso scopo, come il brodo tetrationato di sodio..
Indice articolo
I peptoni contenuti nel brodo fungono da nutrienti per il corretto sviluppo dei microrganismi. I ceppi di Salmonella utilizzano i peptoni come fonte di azoto, vitamine e amminoacidi.
Il lattosio è il carboidrato fermentabile, mentre il selenito di sodio è la sostanza inibitoria che blocca la crescita dei batteri Gram positivi e della maggior parte dei batteri presenti nella flora intestinale, soprattutto quelli della famiglia delle Enterobacteriaceae. Il fosfato di sodio è il tampone che stabilizza il pH del mezzo.
Nel caso della variante di brodo di selenite contenente L-cistina, questo composto aggiuntivo è un agente riducente che riduce al minimo la tossicità della selenite, aumentando il recupero da Salmonella..
Se hai i componenti della miscela, puoi pesare:
4 g di selenito di sodio idrogeno anidro.
10 g di fosfato di sodio anidro.
5 grammi di peptoni.
4 g di lattosio.
Sciogliere i composti in 1 litro di acqua distillata sterile. Può essere riscaldato leggermente per dissolversi completamente.
Alcuni laboratori espongono il terreno per 10 minuti a vapore fluente per sterilizzarlo, poiché non si dovrebbe usare un'autoclave. Se il terreno è sterilizzato, può essere conservato in frigorifero fino al momento dell'uso..
Può anche essere preparato non sterile e servito direttamente da 10 a 15 ml in provette sterili.
In questo caso va lasciato riposare e utilizzato immediatamente. Poiché il terreno non è sterile, non può essere conservato in frigorifero per un uso successivo..
Se il terreno commerciale è disponibile, pesare 23 g del terreno disidratato e scioglierlo in un litro di acqua distillata sterile. Riscaldare brevemente per terminare lo scioglimento. Non sterilizzare in autoclave. Servire asetticamente 10 o 15 ml in provette sterili.
Il pH finale del mezzo deve essere 7,0 ± 0,2.
Va notato che il colore del terreno disidratato è beige e la preparazione è ambra chiara e traslucida..
Contiene gli stessi composti del brodo di selenite, ma vengono aggiunti 10 mg di cistina. Il resto della procedura è esattamente lo stesso descritto sopra.
Questo terreno è speciale per essere utilizzato negli studi epidemiologici, nei casi in cui la malattia non è nella sua fase acuta, pazienti asintomatici o portatori sani.
L'isolamento del genere Salmonella è generalmente difficile, poiché normalmente si tratta solo di campioni scarsamente contaminanti. Essendo in poche quantità, è facilmente sovrapposto alla crescita di altri generi batterici che si trovano in maggiore quantità..
D'altra parte, la materia prima con cui sono realizzati gli alimenti trasformati è spesso esposta al calore, ai processi di disidratazione, all'uso di disinfettanti, radiazioni e conservanti, tra gli altri..
Pertanto, le Salmonelle presenti nella materia prima vengono abusate sottoponendo il prodotto ai suddetti processi industriali. Allo stesso modo, nel caso di campioni clinici come le feci, i ceppi possono essere deboli se provengono da pazienti che sono stati trattati con antibiotici..
Pertanto, qualsiasi campione in cui si sospetta la presenza di Salmonella deve essere pre-arricchito in brodo di lattosio e successivamente arricchito in brodo di selenite per ottimizzarne il recupero in terreni selettivi, come agar SS, agar xilosio, lisina desossicolato (XLD), Agar Hektoen (HE) e agar verde brillante, tra gli altri.
Per i campioni di feci, prelevare 1 g di campione e sospendere in una provetta con 10-15 ml di brodo di selenite. Se le feci sono liquide, prendi 1 ml e sospendi nel brodo. Per i tamponi rettali, scaricare il materiale del tampone nel brodo.
Nei campioni di cibo solido prelevare 1 gr e sospendere nel brodo di selenite.
Negli alimenti liquidi mescolare in parti uguali con il brodo di selenite a doppia concentrazione.
Per i campioni di urina, centrifugare, scartare il surnatante, prendere tutto il sedimento e sospenderlo nel brodo di selenite..
I brodi vengono incubati a 37 ° C per 24 ore di incubazione. La crescita batterica è evidenziata dalla torbidità. È inoltre possibile includere una provetta aggiuntiva per campione per l'incubazione a 42 ° C. Successivamente, semina terreno solido selettivo dal brodo di selenite.
Per controllare la sterilità, un brodo di selenite da ciascun lotto non inoculato viene incubato a 37 ° C per 24 ore. Non è prevista alcuna torbidità o cambiamento di colore del terreno..
Per controllare il corretto funzionamento del terreno, possono essere utilizzati ceppi noti, come:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus mirabilis ATCC 43071.
I risultati attesi sono:
Il brodo di selenite è tossico per la pelle umana, pertanto deve essere evitato il contatto diretto..
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