Il Agar XLD o Xylose Lysine Deoxycholate Agar è un terreno di coltura solido selettivo e differenziale per l'isolamento di enteropatogeni. Taylor ha progettato la formula di agar XL (xilosio, lisina) al fine di migliorare l'isolamento del genere Shigella.
Ha osservato che questo genere è stato inibito nella maggior parte dei terreni destinati all'isolamento di enteropatogeni. Successivamente, sono stati aggiunti desossicolato di sodio, tiosolfato di sodio e citrato di ammonio ferrico per aumentarne la selettività. Questa formula si è dimostrata utile sia per l'isolamento di Shigella che per Salmonella.
L'agar XLD è composto da estratto di lievito, sodio desossicolato, xilosio, lisina, lattosio, saccarosio, tiosolfato di sodio, citrato di ammonio ferrico, cloruro di sodio, rosso fenolo e agar. Nella maggior parte dei laboratori di batteriologia, vengono utilizzati duo XLD agar e SS agar per studiare campioni fecali per Shigella e Salmonella..
Altri laboratori preferiscono la combinazione di CHROMagar Salmonella e XLD agar, tra le altre opzioni disponibili. Questi duetti possono essere preparati in doppie piastre di Petri. Da un lato pongono XLD agar e sul lato opposto l'altro terreno scelto.
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L'agar XLD contiene un estratto di lievito, che funge da fonte di nutrienti per i microrganismi che si sviluppano su questo agar. Inoltre la presenza di carboidrati (xilosio, saccarosio e lattosio) fornisce energia ai batteri che possono fermentarli.
Come sostanza inibitrice, contiene sodio desossicolato; Ciò impedisce la crescita di batteri Gram positivi, rendendo il terreno selettivo.
Come già accennato, l'agar XLD contiene xilosio; Questo carboidrato viene fermentato da tutti i batteri che crescono in questo terreno ad eccezione del genere Shigella..
Questa è una delle caratteristiche che gli conferiscono il suo carattere differenziale, poiché le colonie di Shigella si distinguono dalle altre sviluppando colonie rosse, mentre gli altri batteri producono colonie gialle.
Il genere Salmonella fermenta anche lo xilosio, generando inizialmente colonie gialle. Tuttavia, dopo aver esaurito il carboidrato xilosio, attacca la lisina per il suo enzima lisina decarbossilasi. La decarbossilazione della lisina genera alcali che trasformano il colore della colonia e del mezzo circostante al rosso originale.
Questo comportamento è svolto solo dalla Salmonella, poiché i coliformi che decarbossilano la lisina non sono in grado di alcalinizzare il terreno. Questo perché i coliformi fermentano anche il lattosio e il saccarosio presenti; quindi, la produzione di acidi è molto alta, lasciando la colonia gialla in questi batteri.
Va notato che il genere Salmonella non fermenta il saccarosio o il lattosio.
L'agar XLD consente anche il rilevamento delle specie di Salmonella che producono H.DueS; Per questo, ha la fonte di zolfo rappresentata dal tiosolfato di sodio e uno sviluppatore di reazione che è citrato di ammonio ferrico..
Quest'ultimo reagisce con l'HDueS (gas incolore) e forma un precipitato nero visibile insolubile di solfato di ferro. In questo senso, le caratteristiche delle colonie di salmonella saranno rosse con un centro nero..
Va notato che per la reazione di formazione di H.DueSì, è necessario un pH alcalino. Ecco perché altre Enterobacteriaceae che formano H.DueS non possono farlo o lo fanno male in questo mezzo, perché l'elevata acidità che producono durante la fermentazione dei carboidrati presenti inibisce o ostacola la reazione.
Infine, il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico; l'agar è l'agente solidificante e il rosso fenolo rileva i cambiamenti nel pH, cambiando il colore delle colonie e del terreno.
Pesare 55 g di terreno XLD disidratato e sciogliere in 1 litro d'acqua. Riscaldare e mescolare il composto fino a raggiungere il punto di ebollizione. Non surriscaldare, poiché il calore danneggia il mezzo e crea un precipitato che altera la morfologia delle colonie tipiche.
Questo mezzo non deve essere autoclavato. Quando si dissolve, deve essere passato a bagnomaria a 50 ° C. Quando si raffredda va servito direttamente su piastre Petri sterili. Possono essere versati in piatti singoli o doppi. Si lasciano solidificare e si conservano in frigorifero fino al momento dell'uso..
Temperare prima dell'uso. Trattandosi di un terreno non sterile, si consiglia di prepararlo in prossimità della data di utilizzo..
Il pH finale del mezzo dovrebbe essere 7,4 ± 0,2. Il colore del terreno preparato è rosso-arancio, traslucido, senza precipitato..
Se si dispone di agar base xilosio lisina (XL), è possibile aggiungere sodio desossicolato, sodio tiosolfato e ferro ammonio citrato. In questo modo si ottiene la formula XLD agar.
L'agar XLD è utilizzato per il recupero di enteropatogeni, principalmente del genere Shigella e secondariamente del genere Salmonella. È utile per valutare campioni di feci, acqua e cibo.
I campioni di feci possono essere seminati direttamente su XLD agar, facendo una buona distribuzione del materiale per ottenere colonie isolate.
Per migliorare il recupero della Salmonella, l'agar XLD può essere seminato da terreni di arricchimento per Salmonella..
Nel caso degli alimenti si possono utilizzare brodi di arricchimento per Salmonella e Shigella. Per la Salmonella puoi usare il brodo di selenite cistina, brodo tetrationato verde brillante, tra gli altri..
Nel caso di Shigella può essere arricchito con brodo Shigella con 0,5 µ / ml di novobiocina, incubato a 42 ° ± 1 ° C per 16-20 ore.
Nell'analisi dell'acqua, si raccomanda, tra l'altro, la tecnica di filtrazione su membrana e l'uso di XLD agar..
Il terreno seminato viene incubato in aerobiosi a 35 ° C per 24-48 ore..
Si osservano le colonie tipiche di ogni genere, le colonie sospette devono essere sottoposte a test biochimici per la loro identificazione.
I seguenti ceppi batterici possono essere utilizzati per valutare il controllo di qualità del terreno: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abbonda DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.
Il genere Salmonella è caratterizzato dal presentare in questo mezzo colonie rosse con un centro nero o colonie completamente nere. Mentre nel genere Shigella le colonie devono essere rosse, cioè il colore del terreno.
In caso di Escherichia coli si prevede che sia totalmente o parzialmente inibito; se cresce le colonie sono gialle. In modo da Proteus mirabilis si prevede una scarsa crescita con colonie rosa con o senza centro nero. Alla fine il genere Klebsiella crescerà come colonie gialle.
L'agar XLD è ampiamente utilizzato nei laboratori di batteriologia grazie alla sua elevata efficienza per il recupero di Shigella e ha anche un buon recupero del genere Salmonella.
Rall et al. (2005) nel loro lavoro intitolato "Valutazione di tre brodi di arricchimento e cinque terreni solidi per il rilevamento di Salmonella nel pollame" hanno dimostrato che dei 3 terreni classici testati (agar verde brillante, agar SS e agar XLD), XLD l'agar ha avuto il miglior tasso di recupero.
Le percentuali di recupero erano le seguenti: 13,8% per agar verde brillante, 27,6% per SS e 34,5% per XLD. È stato superato solo dal terreno cromogenico Rambach agar con il 48% di recupero e CHROMagar con il 79,3%.
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