Il agar verde brillante È un terreno di coltura solido, con un alto grado di selettività. Viene utilizzato esclusivamente per l'isolamento di ceppi del genere Salmonella, tuttavia esistono alcune eccezioni, come le specie typhi e paratyphi che non crescono in questo terreno..
La ricerca del genere Salmonella è frequente nei campioni di feci, acqua o cibo. In questo senso, questo mezzo può essere molto utile. Questo agar è stato creato nel 1925 da Kristensen, Lester e Jurgens, successivamente è stato modificato da Kauffmann.
È composto da pluripeptoni da digestione peptica di tessuto animale e digerito pancreatico di caseina, contiene inoltre estratto di lievito, cloruro di sodio, lattosio, saccarosio, rosso fenolo, verde brillante e agar-agar..
Si caratterizza per essere un ambiente piuttosto inospitale per la maggior parte dei batteri, favorendo la crescita della Salmonella, tuttavia alcuni coliformi sono in grado di sopravvivere in esso sviluppandosi debolmente.
È importante notare che il genere Shigella non cresce in questo ambiente e nemmeno lo fa Salmonella typhimurium, nessuno dei due Salmonella paratyphi. Pertanto, se si desidera isolare questi microrganismi, è necessario utilizzare altri terreni, come l'agar XLD, tra gli altri..
Indice articolo
Ciascuno dei componenti che compongono il terreno svolge una funzione specifica che determina le caratteristiche e le proprietà dell'agar..
I pluripeptoni e l'estratto di lievito sono la fonte di nutrienti da cui i microrganismi traggono l'azoto ei minerali necessari al loro sviluppo. Il lattosio e il saccarosio sono fonti di energia per i microrganismi in grado di fermentarli..
Il verde brillante è la sostanza inibitoria che impedisce la crescita di batteri Gram positivi e un gran numero di microrganismi Gram negativi..
Il cloruro di sodio fornisce stabilità osmotica al terreno. Mentre il rosso fenolo è l'indicatore di pH, cambia colore quando rileva la produzione di acidi dalla fermentazione dei carboidrati..
Le colonie non fermentanti di lattosio e saccarosio crescono su questo terreno di colore bianco rosato o trasparente, su fondo rosso. Ad esempio, batteri del genere Salmonella.
Mentre i batteri che fermentano il lattosio o il saccarosio in grado di crescere su questo terreno sviluppano colonie giallo-verdastre o verde-giallastre su uno sfondo giallo-verdastro. Per esempio, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae.
Esistono altre varianti di agar verde brillante; Agar Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) e Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.
Contiene Trypticase Soy Agar, citrato ferrico di ammonio, sodio tiosolfato pentaidrato, rosso fenolo, glucosio, verde brillante, novobiocina e acqua distillata.
Viene utilizzato per l'isolamento delle colonie di Salmonella da campioni di feci.
In questo caso, il verde brillante e la novobiocina sono le sostanze inibitorie che impediscono la crescita dei batteri Gram positivi e di alcuni microrganismi Gram negativi..
Il tiosolfato di sodio è la fonte di solfuro e il citrato ferrico è la fonte di ferro, entrambi necessari per rivelare la produzione di idrogeno solforato attraverso la formazione di un precipitato di solfuro ferrico nero..
Il glucosio è il carboidrato fermentabile e il rosso fenolo è l'indicatore di pH..
In questo terreno, le colonie di Salmonella si sviluppano grandi con un centro nero circondato da un alone rossastro e seguito da una chiara area visibile. Alcuni ceppi di Citrobacter freundii producono colonie identiche alla Salmonella.
Questo terreno contiene tripticasi soia agar, citrato ferrico di ammonio, tiosolfato di sodio, lattosio, glicerolo, verde brillante, novobiocina e acqua distillata..
La differenza tra questo terreno e il precedente è che il glucosio viene sostituito da lattosio e glicerolo e il rosso fenolo non viene utilizzato..
Il terreno viene utilizzato anche per isolare le specie di Salmonella, le colonie si sviluppano di colore nero, a causa della produzione di idrogeno solforato.
Solo le colonie che non producono acido dal glicerolo o dal lattosio raggiungono la produzione di H.DueÈ sufficiente, perché il basso pH interferisce con la formazione di H.DueS. Ciò si traduce in colonie incolori per la maggior parte delle specie Proteus e Citrobacter..
-Pesare 58 grammi del terreno disidratato ottenuto in commercio. Aggiungilo a un litro di acqua ridistillata. Mescolate, lasciate riposare qualche minuto e ponete il preparato sotto una fonte di calore fino a quando non si scioglie completamente..
-Autoclave a 121 ° C per 15 minuti, non superare il tempo di sterilizzazione.
-Lasciar riposare e servire caldo in piastre Petri sterili. Il pH finale dovrebbe essere 6,9 ± 0,2.
-Lasciar solidificare e conservare in frigorifero fino al momento dell'uso. Prima di seminare i piatti dovrebbe prendere la temperatura ambiente.
-Il mezzo in polvere è di colore verde e preparato assume un colore marrone-arancio o verde-rossastro, a seconda del pH e dell'azienda commerciale. Un colore molto marrone è indicativo che l'agar si è surriscaldato..
-Una volta che l'agar si è solidificato, non è consigliabile rifonderlo, poiché il terreno si deteriora..
Questo terreno viene utilizzato per cercare ceppi del genere Salmonella da campioni di feci e latticini, tra gli altri..
Trattandosi di un ambiente piuttosto inospitale, si consiglia di seminare un abbondante inoculo se si utilizza il campione diretto. In caso contrario, è necessario eseguire un pre-arricchimento e un arricchimento dei campioni prima della semina in questo terreno..
Poiché alcuni ceppi di Salmonella sono inibiti o crescono con difficoltà, si raccomanda di accompagnare questo terreno con altri agar selettivi per Salmonella.
Ogni colonia con una caratteristica tipica di Salmonella deve essere sottoposta a test biochimici per la sua identificazione definitiva..
Per testare le buone prestazioni del terreno agar verde brillante, è possibile utilizzare i ceppi ATCC per osservarne lo sviluppo..
I ceppi più frequenti utilizzati per il controllo di qualità sono: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus E se ne andò 6538.
I primi 3 dovrebbero dare colonie bianche rosate o trasparenti su fondo rosso. Salmonella con buon sviluppo e Proteus con crescita scarsa o regolare.
Per Klebsiella ed Escherichia sono previste colonie giallo verdastre con sfondo giallo e nel caso di Shigella e Staphylococcus dovrebbero essere inibite.
Il terreno disidratato deve essere conservato a temperatura ambiente, in un luogo asciutto, poiché il terreno è molto igroscopico.
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