Il agar biliare esculina È un terreno di coltura solido selettivo e differenziale. Viene utilizzato come test diagnostico per determinare la capacità di un determinato microrganismo di crescere in un mezzo contenente bile e anche di scomporre l'esculina glucosidica in esculetina e glucosio..
Questo test diagnostico viene utilizzato per differenziare le specie del genere Streptococcus appartenenti al gruppo D (bile esculin positivo), da altri gruppi di Streptococcus che reagiscono negativamente a questo test..
Va notato che alcuni Streptococchi del gruppo viridans possono idrolizzare l'esculina, ma non sono in grado di crescere in presenza di bile ad una concentrazione del 40%, quindi, in questo terreno la reazione per questo gruppo è negativa.
D'altra parte, il mezzo di esculina biliare è utile anche per la diagnosi di Listeria monocytogenes o specie di Aerococcus sp, poiché questi microrganismi sono positivi all'esculina biliare.
L'agar biliare esculina è composto da peptone, estratto di carne, bile di bue, esculina, citrato di ferro, agar e acqua distillata. Alcune case commerciali includono sodio azide nella composizione del mezzo.
Il terreno può essere preparato in laboratorio se si hanno tutti i composti separatamente oppure può essere preparato dal terreno disidratato commerciale..
Indice articolo
Il mezzo di esculina biliare contiene peptoni ed estratto di carne, entrambi i composti forniscono i nutrienti necessari per la crescita dei microrganismi.
Contiene anche esculina; Questo composto è un glucoside formato dall'unione di un semplice monosaccaride (glucosio) con un composto chiamato 6,7-diidrossicumarina o esculetina (aglucone), legati da un legame acetale o glucosidico.
Il test si basa sul mostrare se i batteri sono in grado di idrolizzare l'esculina. Se ciò accade, l'esculina si scompone in esculetina e glucosio. Esculetina reagisce con il ferro presente nel terreno, formando un composto marrone scuro, quasi nero.
Ciò significa che il citrato ferrico agisce come sviluppatore di reazioni. Questa caratteristica rende l'agar biliare esculina un terreno differenziale..
Da parte sua, la bile è un inibitore che impedisce la crescita di alcuni microrganismi, quindi i batteri, prima di scindere l'esculina, devono poter crescere in presenza di bile. Pertanto, questo terreno è considerato selettivo.
I batteri che possono svilupparsi in questo ambiente sono principalmente quelli che vivono nell'ambiente intestinale.
In questo senso, alcune società commerciali aggiungono sodio azide al terreno per inibire ulteriormente la crescita di bacilli enterici Gram negativi, aumentando la selettività del terreno per la crescita dello streptococco..
Infine, l'agar conferisce la consistenza solida al mezzo e l'acqua è il solvente dei composti..
Pesare:
5 g di peptoni
3 g di estratto di carne
40 g di bile di manzo
1 g di esculina
0,5 g di citrato di ferro
15 g di agar
1000 ml di acqua distillata
In caso di aggiunta di sodio azide, pesare 0,25 g / litro e aggiungerla alla miscela.
Sciogliere i componenti in un litro di acqua distillata, riscaldare fino a completa dissoluzione dei composti. Distribuire 5 ml in provette con tappo a vite da 16 x 125 mm. Autoclave a 121 ° C, 15 libbre di pressione per 15 minuti.
Togliere dall'autoclave e inclinare le provette su un supporto, in modo che l'agar si solidifichi in un ampio becco a flauto.
Conservare in frigorifero fino al momento dell'uso. Portare a temperatura ambiente prima della semina.
Possono essere preparate anche piastre di agar biliare esculina; in questo caso l'intera miscela viene autoclavata in un pallone e successivamente distribuita in piastre Petri sterili. Si lasciano solidificare e si conservano in frigorifero..
Il pH del mezzo deve essere 6,6 ± 0,2.
Pesare la quantità specificata dall'inserto. Questo può variare da una casa d'affari all'altra. Successivamente, procedere come la procedura spiegata sopra.
Il pH del mezzo dovrebbe essere 6,6 ± 0,2. Il colore del terreno disidratato è beige chiaro e il terreno preparato è ambra scuro.
Il mezzo di esculina biliare viene utilizzato principalmente per differenziare lo streptococco di gruppo D (positivo per l'esculina biliare), dal resto dei gruppi di streptococco (negativo per l'esculina biliare).
La combinazione del test di crescita del brodo ipersalato con il test dell'esculina biliare può essere utilizzata per identificare uno speciale gruppo di streptococco di gruppo D chiamato Enterococcus.
Questo gruppo speciale di Streptococcus appartiene al gruppo D del genere citato e sono in grado di idrolizzare l'esculina in presenza di bile come fanno il resto dei membri del gruppo D, ma sono anche in grado di svilupparsi in un mezzo ipersalato (BHI con cloruro di sodio al 6,5%), una proprietà che fa la differenza.
Pertanto, gli streptococchi che idrolizzano la bile dell'esculina ma non crescono in brodo ipersalato sono chiamati streptococchi di gruppo D non enterococchi..
Inoculare il terreno preferibilmente da un brodo puro Todd-Hewitt 24 ore.
Aggiungere 2 gocce alla superficie del terreno con una pipetta Pasteur e distribuire nel terreno con un'ansa di platino..
Incubare a 35 ° C per 48 ore, mentre il tempo di incubazione è soddisfatto, può essere monitorato per vedere se c'è una reazione positiva. Se alla fine del tempo la reazione rimane negativa, può essere incubata fino a 72 ore.
Reazione positiva: Aspetto di un colore marrone scuro, quasi nero nel becco della scanalatura (nel caso del test in provetta) o annerimento dell'agar intorno alle colonie (nel caso del test su piastra).
Reazione negativa: nessun annerimento del terreno o nero appare in meno della metà della provetta dopo 72 ore di incubazione. D'altra parte, la crescita batterica nel terreno senza la comparsa del colore nero dovrebbe essere considerata un test negativo..
Per valutare la qualità del mezzo, un ceppo di Enterococcus faecalis ATCC 29212 come controllo positivo e ceppo di Streptocococus non appartenente al gruppo D come controllo negativo.
-I terreni che non contengono sodio azide consentono la crescita di bastoncini gram negativi enterici. Alcuni di loro possono annerire la metà.
- Alcune case commerciali aggiungono una bassa concentrazione di bile (10%) e per questo motivo alcuni Streptococchi che non appartengono al gruppo D possono svilupparsi nel mezzo e idrolizzare l'esculina, che può generare errori di interpretazione..
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