Il Rosso Congo è un colorante azoico per proteine, formato dall'accoppiamento di un sale di diazonio e un anello aromatico attivo. Questa sostanza è in grado di assorbire la radiazione elettromagnetica nello spettro visibile, motivo per cui ha un colore intenso.
È caricato negativamente. Pertanto, ha un'affinità per i componenti cellulari caricati positivamente, come alcune sostanze proteiche. Il suo colore varia a seconda del pH. In questo senso, se il mezzo è acido (< de pH3), el color es azul intenso. Entre pH3 - pH 5,2 es fucsia (zona de viraje), y con >pH 5,2 il colore è rosso intenso.
È una sostanza molto versatile, poiché ha molteplici usi. È stato utilizzato come colorante nell'industria tessile e anche per cellule e tessuti.
Anche per eseguire terreni di coltura che misurano l'azione enzimatica, come indicatore di pH, come sostanza di controllo nella valutazione del corretto funzionamento degli spettrofotometri, nello studio della formazione di biofilm, o nella diagnosi di amiloide..
Allo stesso modo, ha permesso di distinguere i sierotipi batterici e fungini identificando strutture specifiche nella loro parete (lipopolisaccaridi)..
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Questa sostanza fu scoperta da Böttiger nel 1884. È un derivato del diazonio formato dall'acido bis-diazoico della benzidina con acido naftionico. La molecola rosso Congo misura 21 Armstrong e il peso molecolare è di circa 8000 g / mol..
Il rosso Congo si caratterizza per essere solubile in acqua, e ancor di più in solventi organici come l'etanolo, formando una soluzione colloidale.
Ha un'affinità per la cellulosa, il tessuto amiloide e i componenti cellulari caricati positivamente.
Congo Red viene preparato in diverse concentrazioni a seconda della tecnica da utilizzare. La maggior parte usa il rosso Congo all'1%, 2%, 0,1%, tra gli altri.
Ad esempio, per preparare il 2% di rosso Congo, pesare 2 g di colorante alimentare disidratato e aggiungere 100 ml di acqua distillata. Quindi viene conservato in una bottiglia color ambra.
Per un tempo è stato ampiamente utilizzato nell'industria tessile per il suo fissaggio sul cotone, ma attualmente è in disuso perché cancerogeno e anche perché il colore non è stabile, scolorendosi per attrito..
La capacità di formazione del biofilm dei microrganismi ha dimostrato di essere un fattore di virulenza.
In questo senso, il colorante rosso Congo viene utilizzato come metodo per determinare la formazione di biofilm. Il rosso Congo si lega agli esopolisaccaridi presenti nel biofilm. Tuttavia, rispetto ad altri metodi è il meno raccomandato a causa dell'elevato numero di falsi negativi che si verificano.
Il metodo utilizza l'agar rosso Congo, composto da agar sangue come base, glucosio (10 g / l) e colorante rosso Congo (0,4 g / l). I ceppi da valutare vengono seminati nel terreno e incubati per 24 ore a 37 ° C e successivamente incubati per 48 ore a temperatura ambiente..
Un test positivo è evidenziato se si osservano colonie cristalline di colore nero e aspetto secco.
Per valutare se un'apparecchiatura di misurazione dell'assorbanza o della transazione è conforme ai parametri fotometrici stabiliti dalle normative internazionali, è possibile utilizzare una tecnica semplice per stabilire se l'apparecchiatura emette risultati entro i limiti di accettabilità..
Una delle tecniche di valutazione è l'utilizzo del rosso Congo, basato sul punto isosbestico.
Il punto isosbestico è la lunghezza d'onda alla quale il rosso Congo emette la stessa assorbanza indipendentemente da pH, concentrazione e temperatura. Il valore di assorbanza è fisso e può essere utilizzato come riferimento.
Il punto isosbestico teorico del rosso Congo è noto per essere 541 nm. Se il valore ottenuto è diverso è noto che l'apparecchiatura presenta problemi di deriva della lunghezza d'onda e necessita di essere verificata da un tecnico specializzato..
Ortiz et al ... Descrivono un terreno di coltura preparato con colorante rosso Congo e carbossimetilcellulosa chiamato CMC agar, per rilevare i ceppi microbici della cellulite; cioè produttori di cellulasi (endogluconi, esoglucanasi e ß-glucosidasi).
Questo mezzo ha una colorazione intensa. Il colore sarà dissipato dall'azione dell'enzima endoglucanasi che rompe la struttura della carbossimetilcellulosa. Ciò suggerisce una reazione positiva.
La diminuzione della viscosità e dell'assorbanza consente di quantificare l'attività dell'enzima. Ad esempio, in ceppi di Streptomyces sp.
Il rosso Congo ha un'affinità per le strutture polisaccaridiche di alcuni ceppi, ottenendo l'identificazione di questi microrganismi. Tra loro ci sono il Escherichia coli, e il Shigella flexneri.
Le piastre di agar rosso Congo vengono utilizzate anche per ottenere colonie caratteristiche, come nel caso di Azospirillum sp, dando colonie rosso scarlatto, tra l'altro.
Una delle applicazioni più comuni del rosso Congo è la sua utilità nella diagnosi dell'amiloidosi. Questa strana malattia consiste nell'accumulo extracellulare di una proteina anormale in vari organi. Questa proteina anormale è prodotta nel midollo osseo ed è chiamata amiloide..
Il rosso Congo ha un'elevata affinità per questa sostanza. Questa proprietà è stata utilizzata per mostrare la sua presenza in sezioni di tessuto istologico. Il Congo Red viene utilizzato in combinazione con ematossilina / eosina per questo scopo..
L'unione del tessuto amiloide e del rosso Congo avviene attraverso legami idrogeno non polari, tra i gruppi carbossilici e il gruppo amminico. La proteina amiloide fornisce i gruppi carbossilici (COOH) e il rosso Congo il gruppo amminico.
Il tessuto amiloide è colorato in varie tonalità che vanno dal rosa al rosso intenso al microscopio ottico. Nei microscopi con luce doppia polarizzata, queste preparazioni sono osservate con una birifrangenza verde mela patognomonica..
Cioè, presentano dicroismo, poiché le fibre amieloidi sono anisotropiche. Questa osservazione conferma la diagnosi.
La colorazione dei tessuti con il rosso Congo è compatibile con altre metodologie diagnostiche, come i metodi immunocitochimici, ed è persino possibile ricolorare.
La proprietà di opporsi alle variazioni di pH viene utilizzata dalla tecnica chiamata cromoendoscopia..
Questa tecnica utilizza coloranti e indicatori di pH che consentono la rilevazione di determinate patologie. Tra questi c'è l'uso del rosso Congo, che può rivelare focolai di cancro precoce nella mucosa gastrica, essendo usato come indicatore di acidità.
La tecnica si basa sul fatto che il rosso Congo a pH acido è nero. Pertanto, dopo aver posizionato una soluzione di rosso Congo sulla mucosa gastrica, verranno scelte le zone di pallore per prelevare il campione per la biopsia, cioè dove non c'è produzione di acido. Ciò suggerisce la presenza di un focus canceroso o la perdita di cellule parietali..
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