Il reazione xantoproteina è una procedura chimica utilizzata per determinare la presenza o l'assenza di amminoacidi aromatici, come la tirosina e il triptofano, che possono essere in forma libera o costituire proteine solubili, peptidi o polipeptidi.
È stato anche utilizzato per rilevare sostanze tossiche nel sangue che contengono un gruppo benzene nella loro struttura. Questo test è anche noto come reazione xantoproteina Becher..
La reazione della xantoproteina utilizza acido nitrico concentrato, calore e un alcali neutralizzante. Se la soluzione passa dal giallo all'arancio quando la reazione è neutralizzata, il test è considerato positivo. La colorazione osservata è dovuta alla formazione di composti azotati derivati dalla nitrificazione di gruppi benzenici.
Se è necessario quantificare la quantità di proteine totali, è necessario utilizzare altri metodi di determinazione delle proteine, come il biureto..
La reazione xantoproteica viene utilizzata principalmente quando si analizzano sostanze di cui non si conosce la composizione chimica. Questa reazione fa solitamente parte di una serie di test che aiuteranno a determinare la composizione chimica di una particolare sostanza o estratto. Ecco perché è ampiamente utilizzato dai ricercatori.
D'altra parte, la reazione della xantoproteina Becher viene utilizzata per rilevare sostanze fenoliche e indoliche nel sangue, consentendo di prevedere la comparsa di nefropatia, prima che altri parametri successivi vengano aumentati..
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La reazione rileva sostanzialmente la presenza del gruppo benzene, sia negli amminoacidi, sia nelle proteine e nei peptidi. L'acido nitrico agisce sull'anello benzenico degli amminoacidi che lo possiedono, formando composti nitro fenolici.
La reazione necessita di calore per essere eseguita, generalmente si forma un precipitato che annebbia il mezzo rendendolo lattiginoso. Il precipitato può essere bianco o giallo. Infine, richiede una fase di alcalinizzazione che accentui il colore. Per questo, viene utilizzata una base come il 40% di idrossido di sodio o ammoniaca..
La reazione sarà interpretata come positiva se si osserva una forte colorazione gialla durante il processo di riscaldamento o arancione scuro quando la reazione si alcalina. Gli amminoacidi che rileva sono principalmente la tirosina e il triptofano.
Nel caso della fenilalanina, sebbene sia un amminoacido aromatico, il nucleo benzenico di questo amminoacido è difficile da nitrare in una reazione semplice, quindi emetterà una reazione negativa o debole positiva.
In generale, il test della xantoproteina può essere integrato con il test di Hopkins-Cole, che viene utilizzato per identificare specificamente il triptofano. Se il test della xantoproteina è positivo e il test di Hopkins-Cole è negativo, viene esclusa la presenza di triptofano in quella soluzione, indicando la presenza principalmente di tirosina. Allo stesso modo, può anche essere integrato con la reazione Millon per la rilevazione della tirosina, tra le altre cose..
Questa reazione può essere utilizzata anche su campioni di sangue, plasma o siero desalbuminato per la diagnosi di uremia o insufficienza renale. In questo caso si cerca di rilevare le sostanze tossiche (fenoliche e indoliche) prodotte dalla putrefazione intestinale..
Queste sostanze hanno il gruppo benzene e quindi danno una reazione xantoproteica positiva, anche se la sostanza che reagisce non è né un amminoacido né una proteina..
Mettere 1 ml del campione in una provetta pulita e asciutta.
-Aggiungere 0,5 ml di acido nitrico concentrato.
-Incubare la miscela a bagnomaria a 70 ° C per 2 minuti. Preparare preventivamente il bagnomaria alla temperatura indicata.
-Quando si rimuove il tubo dal bagnomaria, è possibile osservare che la soluzione è diventata lattiginosa e ha assunto un certo colore bianco-giallastro..
-La soluzione viene raffreddata facendo cadere acqua fredda alla base del tubo..
-La preparazione viene resa alcalina aggiungendo lentamente (goccia a goccia) una soluzione di idrossido di sodio al 40% fino a quando non si ha un viraggio.
-Se il test è positivo, si formerà un anello arancione scuro all'interfaccia dei liquidi..
-Se la reazione è negativa non ci sarà formazione di colore.
-Erogare 5 cc di acido tricloroacetico al 20% su 5 cc di sangue venoso, plasma o siero, quest'ultimo è il più indicato. Mescolare bene e filtrare.
-Si prendono 2 ml del filtrato e si mescolano con 0,5 ml di acido nitrico. Quindi viene riscaldato fino all'ebollizione, per questo il tubo viene posto direttamente sulla fiamma dell'accendino per 30 secondi. Si raffredda con acqua e si aggiunge 1,5 di cloruro di sodio al 33%..
Viene interpretato come segue:
-Risultato negativo: colore giallastro.
-Risultato positivo (+) giallo limone.
-(++) giallo dorato.
-(+++) da giallo scuro a marrone
Può anche essere interpretato utilizzando una scala colorimetrica di Autenrieth referenziale, costituita da varie concentrazioni di bicromato di potassio. Questo viene preparato in diluizioni 10 in 10 da una soluzione madre allo 0,03874%. Ogni tubo rappresenta una percentuale.
Ci sono due scale di interpretazione chiamate antica e moderna. I valori normali sono:
Vecchia tabella: tra il 75 e l'85%
Tavolo moderno: tra il 15 e il 25%
Se il colore della provetta è al centro di due provette standard, viene effettuata una media tra le due misurazioni.
La soluzione standard di bicromato di potassio viene preparata come segue: si misurano 7,9 ml di bicromato di potassio 10 N e si porta a 100 ml in un matraccio tarato. Per le diluizioni, seguire come mostrato nella tabella colorimetrica di Autenrieth..
L'uso della reazione xantoproteica fa parte di una serie di test biochimici che aiutano a conoscere la composizione chimica di qualche sostanza sconosciuta. Questo test contribuisce all'analisi chimica alla rilevazione di proteine che contengono gruppi benzenici nella loro struttura..
Questa reazione è ampiamente utilizzata dai ricercatori in vari studi su sostanze di interesse..
In questo senso, Vásquez-Jorge e collaboratori hanno utilizzato questa e altre reazioni per studiare il contenuto proteico dei fluidi estratti dalle mangrovie. (Crassostrea rhizophorae).
Allo stesso modo, Rojas et al. (2009) hanno utilizzato una serie di test, inclusa la reazione xantoproteica, per analizzare i glicomacropeptidi nei precipitati di siero di ricotta..
D'altra parte, la reazione della xantoproteina Becher è stata modificata da Volhard per essere utilizzata per altri scopi. In questo caso, per la rilevazione di sostanze fenoliche e indoliche che possono salire molto prima (settimane o mesi) prima che aumentino i livelli di urea e azoto residuo nel sangue..
Questi rifiuti tossici si formano dalla putrefazione intestinale del cibo.
Queste sostanze si accumulano nel sangue quando non vengono eliminate correttamente, pertanto un test xantoproteico positivo può prevedere l'insorgenza precoce di un'insufficienza renale vera e propria o uno stato di uremia..
A seconda dell'intensità del colore, puoi determinare quanto è avanzato. In questo caso il test è quantitativo.
Nelle persone sane questo test dà un leggero colore giallo, corrispondente ai normali livelli di triptofano e tirosina che possono essere nel sangue.
Mentre, nei pazienti con malattie renali, la reazione della xantoproteina è fortemente positiva a causa della presenza delle seguenti sostanze: fenolo, indolo, paracresolo, ossiacidi aromatici, tra gli altri.
Questo test deve essere eseguito da professionisti qualificati. Devono essere prese in considerazione tutte le normative sulla biosicurezza, poiché i reagenti utilizzati sono acidi e basi corrosivi..
Se per sbaglio alcune gocce di acido nitrico cadono sulla pelle o sulle unghie, diventeranno gialle, poiché entrambe le strutture contengono proteine. Inoltre, sulla pelle e sulle mucose provoca gravi ustioni.
In caso di contatto con la pelle, il protocollo da seguire dovrebbe essere quello di lavare immediatamente l'area con acqua e sapone per circa 20 minuti..
Se schizza negli occhi, deve essere lavato con abbondante acqua fresca, cercando di tenere gli occhi aperti..
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