Il blu lattofenolo o il cotone blu è un preparato con semplici proprietà coloranti. Viene utilizzato nei laboratori clinici per colorare principalmente strutture fungine come ife, tubi germinali e spore..
Aiuta nella diagnosi presuntiva o preliminare di alcuni funghi, tuttavia è sempre consigliabile rafforzare la diagnosi con test più specifici, come test biochimici o sierologici..
Il blu lattofenolo è composto da acido lattico, blu di anilina, glicerina, fenolo e acqua deionizzata. Può essere preparato in laboratorio o può essere acquistato pronto all'uso. Una volta preparato è pronto per essere utilizzato, in nessun caso va diluito, poiché questa azione darà risultati terribili.
La concentrazione dei suoi componenti lo rende ideale per la colorazione delle strutture fungine, poiché il fenolo elimina il microbiota batterico che l'accompagna, mentre l'acido lattico genera un film protettivo attorno alla struttura fungina. Infine, il blu di anilina ha un'affinità per aderire alle strutture del fungo..
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Con il blu lattofenolo, viene eseguita una semplice colorazione delle strutture fungine di una certa cultura micologica. Si chiama semplice perché utilizza un solo colorante.
Il blu lattofenolo, oltre a colorare, funge anche da chiarificante del campione, grazie all'azione congiunta di acido lattico e fenolo, inoltre il fenolo si comporta come un mordente e allo stesso tempo previene la lisi del microrganismo inibendo l'idrolitico enzimi che possono essere presenti.
Mentre l'acido lattico preserva la morfologia delle strutture del fungo.
D'altra parte, il blu di anilina ha la proprietà di aderire o legarsi a strutture contenenti chitina. Le strutture si colorano di azzurro.
Va notato che la parete cellulare dei microrganismi fungini, in particolare le muffe, contiene chitina, motivo per cui questo colorante è ideale per colorare questi microrganismi..
La soluzione di blu lattofenolo è un colorante acquoso leggermente torbido, leggermente torbido, fortemente acido, di colore azzurro. Rimane stabile se conservato tra 15 ° C e 25 ° C. La bottiglia deve essere mantenuta ben chiusa. È irritante e corrosivo per la pelle e le mucose.
La formula per preparare un litro di blu lattofenolo è la seguente:
-250 g / L di acido lattico
-1,0 g / L blu di anilina o blu di metile
-500 g / L di glicerina
-Fenolo 250 g / L
-250 ml di acqua deionizzata o distillata.
Il fenolo viene sciolto nell'acqua precedentemente riscaldata. L'acido lattico e la glicerina vengono aggiunti e miscelati molto bene. Infine, il blu di anilina si dissolve. Si mescola di nuovo ed è pronto per l'uso.
Le porzioni per preparare 80 ml di soluzione di blu di lattofenolo sono:
-20 g di cristalli di fenolo
-20 ml di acido lattico
-40 ml di glicerina o glicerolo
-20 ml di acqua distillata.
Serve per macchiare strutture fungine e, attraverso le caratteristiche morfologiche osservate a livello microscopico, per poter fare una diagnosi presuntiva del fungo.
- Si prende una pura cultura del fungo da cui si vogliono osservare le sue strutture.
- È preferibile lavorare in cappa a flusso laminare, o sotto l'accendino, utilizzando maschera e guanti, poiché è necessario rispettare le norme di biosicurezza, perché la maggior parte delle muffe sono facili da spargere nell'ambiente e quindi rappresentano un pericolo per l'operatore.
- Una goccia di lattofenolo blu viene posta su un vetrino..
- Un quadratino di nastro adesivo di buona qualità viene tagliato e fatto aderire con molta cura all'estremità del manico in platino, già sterilizzato e freddo..
- Il manico in platino viene avvicinato alla parte più superficiale della colonia fungina e la coltura viene toccata con molta attenzione, esattamente dove si trova il nastro adesivo..
- Viene quindi portato sul vetrino e posizionato appena sopra la goccia di lattofenolo blu, facendo attenzione che il nastro sia perfettamente allungato e lubrificato con il colorante. Il manico in platino viene rimosso con molta delicatezza.
- Un'altra goccia di lattofenolo blu viene posta sul nastro e un vetrino sopra. Non esercitare troppa pressione per evitare di distruggere le strutture del fungo, poiché queste sono estremamente fragili. La tintura dovrebbe essere lasciata agire per circa 3 o 4 minuti.
- Trascorso questo tempo, la preparazione è pronta per essere osservata al microscopio con ingrandimenti 10X o 40X. Se è richiesta l'osservazione a 100X, utilizzare olio per immersione.
- Le strutture del fungo, in generale, sono macchiate di blu, ad eccezione dei funghi dematiaci che manterranno il loro caratteristico colore marrone di questo tipo di fungo..
Se è necessario studiare un campione biologico diretto, come espettorato, pus, essudati, secrezioni, tra gli altri, questi devono avere una procedura preventiva per la decontaminazione del campione. La soluzione NaOH viene utilizzata per questo.
In caso di campioni di capelli questi possono essere tinti direttamente.
Diversi peli affetti (10 in totale) vengono prelevati dalle presunte lesioni della tinea capitis (aree alopeciche) e posti su un vetrino (da 3 a 4 peli per vetrino). Poche gocce di lattofenolo blu vengono poste sopra e immediatamente coperte con un vetrino coprioggetto..
Afferrare il vetrino con una pinza e scaldare delicatamente su un fornello. Per fare questo, fai da 3 a 4 passaggi veloci attraverso la fiamma. Osservare il microscopio a 40X e cercare le spore all'esterno o all'interno dei capelli (rispettivamente ectothrix o endothrix). Se necessario aggiungere olio per immersione e osservare a 100X.
Dopo l'incubazione della coltura presuntiva di candida albicans in siero umano per 2-4 ore a 37 ° C, prendere una porzione della soluzione e colorare con blu lattofenolo. La preparazione viene osservata al microscopio a 40X. Il tubo germinale è presente e le blastospore si colorano di blu brillante.
La National Fire Protection Association (NFPA) stabilisce la scheda di dati di sicurezza per le sostanze chimiche in termini di rischio che rappresenta secondo vari aspetti, questi sono simboleggiati da un rombo colorato e da un numero compreso tra 0 e 4.
I rischi per la salute sono identificati in blu, l'infiammabilità in rosso, l'instabilità o reattività in giallo e qualsiasi pericolo speciale in bianco..
Il rischio per la salute rappresentato dal blu lattofenolo secondo l'NFPA è di livello 3. Ciò significa che la sostanza è estremamente pericolosa se ingerita oa diretto contatto con la pelle o le mucose..
È una sostanza altamente corrosiva e irritante.
A contatto con la pelle e le mucose provoca gravi ustioni.
Se ingerito può causare mal di testa, confusione, letargia, perdita di coscienza, arresto respiratorio e persino la morte..
Secondo l'NFPA, il Lactophenol Blue è classificato di Livello 1 per l'infiammabilità. Ciò significa che brucia solo se riscaldato oltre i 94 ° C..
Elencato sotto l'NFPA al livello 0 (zero) per la reattività. Ciò significa che non ha alcun rischio di reattività, cioè è una sostanza chimicamente stabile..
Non offre rischi speciali aggiuntivi.
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