Il ciclo batteriologico È uno strumento di lavoro utilizzato dai microbiologi per la semina di colture microbiche (batteri o funghi). È forse lo strumento più utilizzato da questi professionisti.
Il suo utilizzo sembra semplice, ma in realtà richiede molto allenamento. Prima di iniziare la semina, l'ansa deve essere sterilizzata nel becco Bunsen, quindi viene prelevato l'inoculo microbico che può provenire da una coltura liquida o da una coltura solida..
Una volta che l'inoculo è stato prelevato, può essere depositato in un mezzo liquido o seminato in un mezzo solido. Dopo ogni procedura il ciclo viene nuovamente sterilizzato. Il manico serve anche per fare strisci microbici su un vetrino.
L'ansa batteriologica ha molti nomi, tra cui: ansa o ansa di platino, ansa di inoculazione o ansa di semina, tuttavia il suo vero nome è loop di Kohle..
Il materiale con cui è realizzata la maniglia è generalmente una lega di nichel-cromo (nichelcromo) o anche platino. Un'altra varietà disponibile sul mercato sono gli anelli batteriologici usa e getta in plastica..
D'altra parte, esistono diversi tipi di circuiti batteriologici, ognuno dei quali svolge una funzione all'interno dei compiti svolti da un microbiologo. La scelta della maniglia dipenderà da ciò che deve essere fatto.
Ad esempio, per eseguire uno striato dovuto all'esaurimento al fine di isolare un microrganismo, si utilizza l'anello di platino che termina in un anello chiuso, indipendentemente dal fatto che sia calibrato o meno..
Se invece si vuole seminare un campione di urina, dove è importante quantificare le CFU, è necessario utilizzare il loop calibrato. Allo stesso modo, per inoculare test biochimici, che richiedono di essere seminati mediante puntura, il cappio dell'ago è essenziale. È importante che la maniglia venga maneggiata da personale addestrato.
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I cicli batteriologici sono costituiti da due estremi. Un'estremità corrisponde alla maniglia o base, mentre l'altra è la maniglia stessa.
La base serve per afferrare la maniglia durante la movimentazione. Di solito è metallico, ma ha un isolante termico per evitare che l'operatore si scotti quando la punta del manico viene sterilizzata sull'accendino. Misura circa 20 cm, anche se può essere più lungo. Ha un filo per regolare la maniglia.
È il fine funzionale, cioè è la parte che entra in contatto con i microrganismi e con i terreni di coltura. È costituito da un filo sottile che viene inserito nella base.
Il manico può essere realizzato in nichelcromo o platino, quindi a volte viene chiamato manico in platino. È lungo circa 6,5 cm e ha uno spessore di circa 0,20 mm. Il manico con il manico può misurare 26,5 cm. Le misure possono variare da produttore a produttore.
Esistono diversi tipi di loop batteriologici e ognuno ha un uso specifico. I tipi di manici sono i seguenti: manico calibrato ad anello, manico ad anello non calibrato, manico diritto o ad ago, manico spatolato, manico a forma di "L" e manico a punta acuminata.
D'altra parte, le maniglie possono essere permanenti o usa e getta. Quelli per uso permanente sono sterilizzati nell'accendino, essendo riutilizzabili e molto resistenti. Sebbene i prodotti monouso siano sterili in fabbrica, vengono utilizzati una sola volta e vengono scartati..
È la maniglia più utilizzata nel laboratorio di microbiologia. Viene utilizzato per prelevare un inoculo da una sospensione microbica (terreno liquido) o una porzione di colonia (terreno solido), da seminare in un altro terreno di coltura, un test biochimico o un terreno più arricchito o selettivo, a seconda dei casi . Utile anche per realizzare strisci microbici su vetrino.
Con questo tipo di ansa, l'inoculo iniziale può essere striato. È inoltre progettato in modo che scivoli dolcemente sull'agar, senza danneggiarlo. Naturalmente, questo richiede uno staff addestrato per gestire la tecnica di semina, applicando la forza e i movimenti corretti per fare una buona striatura..
Con questa maniglia possono essere eseguite varie tecniche di semina. Esempio, i terreni solidi nelle piastre di Petri vengono solitamente seminati dall'esaurimento (esistono diverse tecniche, vedere il video 1).
Questa tecnica mira ad ottenere colonie isolate per poterle studiare ed identificare, soprattutto quando il campione è polimicrobico, cioè la coltura non è pura (contiene più di un tipo di microrganismo)..
I cunei vengono invece piantati in un semplice zigzag per ottenere massa batterica, non essendo necessario in questo caso isolare le colonie.
A volte vengono utilizzati anche per prelevare determinati campioni. Ad esempio, Rojas et al.Usato il ciclo batteriologico per raccogliere campioni di tessuto vaginale raschiato dai ratti..
Questa maniglia, come suggerisce il nome, è calibrata per assumere una quantità specifica di sospensione microbica. Viene utilizzato quando è necessario che l'inoculo sia conforme a quanto standardizzato nella tecnica.
Ad esempio, è molto comune per piantare colture di urina. In questo caso è possibile utilizzare un'ansa calibrata da 0,01 ml e una da 0,001 ml..
Da notare che le maniglie calibrate hanno un margine di errore, che varia in base all'angolo con cui viene prelevato il campione e alle dimensioni dell'imboccatura del contenitore..
Se il manico da 0,001 ml viene inserito verticalmente in un contenitore con bocca piccola (≤ 7 mm), la quantità prelevata sarà del 50% inferiore a quella desiderata.
Ciò avviene perché minore è il diametro dell'imboccatura del contenitore, maggiore è la tensione superficiale e quindi aumentano le forze di adesione tra (vetro - liquido). Ciò fa sì che il carico di liquido assunto dalla maniglia sia inferiore.
Invece, se prelevato con un angolo di 45 ° in un contenitore con imboccatura larga (≥ 22 mm), si può raccogliere il 150% in più della quantità richiesta. In questo caso, la tensione superficiale è inferiore e le forze di coesione vetro / plastica diminuiscono, mentre aumenta la forza di coesione liquido-liquido..
A causa di quanto sopra, altri metodi per la quantificazione delle unità formanti colonie sono talvolta preferiti per le colture di urina..
È anche chiamato un thread handle. Viene utilizzato per inoculare alcuni test biochimici, in particolare quelli che richiedono di essere seminati con la tecnica della puntura. Esempio, supporti semisolidi preparati sotto forma di un blocco, come: supporto SIM, MIO e O / F.
Inoltre, nel caso di MIO e SIM che valutano la motilità, è essenziale che la puntura venga eseguita con un'ansa ad ago, poiché l'interpretazione di una motilità positiva si ha quando i batteri crescono verso i lati dell'inoculo iniziale..
Un test inoculato con un loop loop può falsificare i risultati (falso positivo). Per questo motivo, in questo tipo di semina, bisogna fare attenzione che la foratura sia unica, e che durante la rimozione fuoriesca nella stessa direzione in cui è entrata.
Un altro test che dovrebbe essere seminato con ago anche se è preparato a forma di cuneo è il Kligler. In questo test non è consigliabile che l'ossigeno penetri in profondità nell'agar, poiché è necessario un terreno povero di ossigeno affinché si verifichino determinate reazioni chimiche. Questa maniglia viene utilizzata anche per toccare una colonia specifica al fine di sottocultura.
La maggior parte dei microrganismi dà colonie morbide e facili da eliminare. Tuttavia, esistono alcuni agenti microbici le cui colonie sono dure e secche, ad esempio i micobatteri in generale e alcuni funghi. In questi casi è utile utilizzare il manico spatolato.
Il suo uso più frequente è quello di campionare colture fungine, in particolare muffe..
È utile per prelevare colonie molto piccole presenti in colture polimicrobiche, in modo da poterle subcolturare.
Il manico deve essere sterilizzato prima e dopo l'uso. Per sterilizzare l'ansa batteriologica nell'accendino, procedere come segue: il manico va posto nella parte superiore della fiamma, assumendo una posizione il più verticale possibile, in modo da sterilizzare dalla punta verso l'alto..
Quando il sottile filamento diventa rosso brillante, si può dire che è sterile. Per usarlo, si raffredda e si preleva il campione scelto. (Vedi video 2).
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