Il agar solfito di bismuto è un terreno di coltura solido, selettivo e differenziale, appositamente formulato per l'isolamento di Salmonella enterica, sottogruppo enterica, sierotipo Typhi, tra le altre specie di Salmonella. Il terreno è noto come BSA agar per il suo acronimo in inglese Bismuth Sulfite Agar..
La formula originale per l'agar bismuto solfito è stata creata nel 1927 da Wilson e Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Questo conteneva solfito di sodio, glucosio, soluzione di bismuto, citrato di ammonio, solfato ferroso e agar-agar..
Oggi c'è una modifica del terreno originale, composto da estratto di carne, peptoni di carne e caseina, indicatore di solfito di bismuto, glucosio, fosfato disodico, solfato ferroso, verde brillante e agar-agar..
Ci sono molti mezzi per l'isolamento delle specie Salmonella, ma quando si tratta di recuperare il sierotipo Typhi, l'agar solfito di bismuto ha un notevole vantaggio su di loro, poiché nella maggior parte dei casi si ottiene un recupero molto basso o nullo di questo microrganismo..
Tuttavia, è necessario utilizzare più di un tipo di terreno quando si cerca di isolare enteropatogeni, perché l'agar solfito di bismuto è meno efficace per altre specie di Salmonella e per il genere Shigella, che sono inibite o si sviluppano molto male. In questo agar.
Va notato che di tutte le specie di Salmonella, il sierotipo Typhi è uno degli enteropatogeni più importanti nell'uomo, essendo questo il suo unico serbatoio. Questo sierotipo causa febbre tifoide, gastroenterite, batteriemia e setticemia..
Per questo motivo è importante includere questo agar quando si analizzano campioni di acqua, feci o alimenti in cui si sospetta la sua presenza..
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Come la maggior parte dei terreni di coltura, Bismuth Sulfite Agar contiene sostanze nutritive per promuovere la crescita batterica, come i peptoni e l'estratto di carne. Allo stesso modo, il glucosio funziona come una fonte di energia e carbonio..
Tuttavia, non tutti i batteri cresceranno su questo terreno, poiché Bismuth Sulfite Agar è un terreno selettivo. Contiene composti che inibiscono la crescita di microrganismi Gram positivi e alcuni batteri Gram negativi. Questi composti sono: l'indicatore bismuto solfito e verde brillante.
Da parte sua, il fosfato disodico mantiene l'osmolarità e il pH del mezzo.
Inoltre, l'agar bismuto solfito è un mezzo differenziale grazie alla presenza di solfato ferroso, che mostra la formazione di HDueS. L'HDueS formato dai batteri reagisce con il solfato ferroso e forma un precipitato nero insolubile chiaramente visibile.
Infine, l'agar-agar fornisce la consistenza solida al terreno..
Pesare 52,3 g di terreno disidratato e sciogliere in un litro d'acqua. Riscaldare la miscela a ebollizione per 1 minuto mescolando spesso, fino a completa dissoluzione. Non surriscaldare troppo. Questo terreno non è autoclavato poiché il calore estremo danneggia il terreno di coltura..
Lasciar raffreddare a 45 ° C e agitare prima di servire in piastre Petri sterili. Si consiglia di realizzare lastre di buon spessore. Per questo, 25 ml devono essere versati in ogni piatto. Lasciate solidificare. Trattandosi di un terreno non sterilizzato, è normale che se ne suggerisca l'uso immediato.
Tuttavia, uno studio condotto da D'aoust nel 1977, ha dimostrato che c'è una migliore ripresa del Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis poiché il Bismuth Sulfite Agar Medium invecchia, le prestazioni dei sierotipi non sono influenzate Typhi Y Paratyphi B.
D'aoust consiglia di utilizzare le piastre il giorno 4 di refrigerazione, sebbene avverta che con l'invecchiamento del mezzo, la selettività diminuisce, sviluppando più facilmente ceppi di Proteus vulgaris.
Per questo motivo, per campioni altamente contaminati, come le feci, è preferibile utilizzare il terreno appena preparato. Altrimenti utilizzare il giorno 4 della sua preparazione. Altri autori consigliano di utilizzare le piastre il giorno successivo alla loro preparazione, conservate in frigorifero..
Le piastre refrigerate devono essere temperate prima dell'uso. Il pH del mezzo dovrebbe essere 7,5 ± 0,2. Il colore del mezzo grezzo è beige e il mezzo preparato è opalescente grigio-verdastro.
Tra i campioni che possono essere piantati in questo terreno ci sono campioni di feci, acqua potabile o acque reflue e cibo..
Per migliorare gli isolati, si consiglia di effettuare un trattamento di pre-arricchimento con brodo di lattosio e dopo l'arricchimento con brodo tetrationato o brodo di selenite di cistina, prima della semina su agar solfito di bismuto..
Le piastre vengono incubate a 35 ° C ± 0,2 per 24-48 ore, in aerobiosi.
Le colonie di Salmonella Typhi di solito si vedono su questo agar entro 24 ore con un centro nero e circondati da un alone verde brillante. Mentre in 48 ore diventano completamente nere per la formazione di idrogeno solforato.
Salmonella Paratyphi A presenta colonie con caratteristiche variabili. Dopo 18 ore di incubazione, si possono osservare colonie nere, verdi o trasparenti con aspetto mucoide. Mentre, a 48 ore, sono completamente neri e talvolta con una pronunciata lucentezza metallica..
S. Paratyphi A tende ad annerire l'ambiente intorno alla colonia.
Salmonella sp mostrano colonie nere o grigio-verdastre, con o senza lucentezza metallica, e possono annerire o meno l'ambiente circostante.
I ceppi coliformi sono generalmente totalmente inibiti, ma se crescono si sviluppano come colonie opache di colore verde o marrone senza lucentezza metallica. Non macchiare il terreno intorno alla colonia.
-Gli inoculi molto deboli possono causare colonie di Salmonella Typhi di colore verde chiaro, che passa inosservato e la cultura viene segnalata come negativa.
- Bismuth Sulfite Agar può inibire il recupero di alcune specie di Salmonella come S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Questo terreno inibisce la maggior parte delle specie del genere Shigella.
- S. Typhi e S. arizonae può dare colonie molto simili.
-Coliformi che producono H.DueS come Proteus e Citrobacter producono colonie simili a quelle di Salmonella, pertanto è necessario eseguire test di identificazione biochimica.
-È necessario eseguire una buona striatura per ottenere colonie isolate; è l'unico modo per osservare le caratteristiche tipiche delle colonie del genere Salmonella.
Per il controllo della sterilità, una piastra non inoculata viene incubata a 37 ° C, si prevede che non vi sia crescita o cambiamento di colore..
Per il controllo di qualità, ceppi noti come:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Ci si aspetta che Escherichia coli Y Shigella flexneri sono parzialmente inibiti sviluppando rispettivamente colonie bruno-verdastre e marroni. Entrambe le salmonelle, invece, devono avere uno sviluppo eccellente con colonie nere con una lucentezza metallica, e infine Enterococcus faecalis deve essere totalmente inibito.
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