Il Trypticasein Soy Agar oppure Trypticase Soy Agar è un terreno di coltura solido, non selettivo e nutriente. È designato dalle lettere TSA per il suo acronimo in inglese Trypticase Soy Agar. È composto da triptein, peptone di soia, cloruro di sodio e agar-agar.
Grazie al suo alto potere nutritivo, è ideale per la coltivazione di microrganismi moderatamente esigenti e non esigenti. Il terreno senza supplementi aggiuntivi non è raccomandato per colture primarie, ma è molto utile per subcolturare ceppi puri e mantenerli vitali, tra gli altri usi..
Inoltre, questo agar serve come base per la preparazione di terreni arricchiti come l'agar sangue, specialmente quando è necessario osservare i modelli di emolisi e montare i taxa di optochina e bacitracina, richiesti nella diagnosi di Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes rispettivamente.
D'altra parte, quando combinato con antibiotici è utile isolare microrganismi anaerobi facoltativi e stretti di importanza clinica da campioni con flora mista..
Infine, la composizione di trypticasein soy agar e le sue prestazioni soddisfano i requisiti stabiliti dalle diverse farmacopee (europea, giapponese e nordamericana)..
Indice articolo
Per il corretto sviluppo dei batteri è necessaria la presenza di apporti energetici, quali aminoacidi, vitamine, basi puriche e pirimidiche..
In questo senso, il triptein e il peptone di soia forniscono questi nutrienti ai microrganismi, permettendo così il loro pieno sviluppo. Tuttavia, per i batteri esigenti è necessario integrare questo agar con sangue defibrinato o sangue riscaldato per aumentarne l'arricchimento..
D'altra parte, se si aggiungono antibiotici al terreno, diventa un terreno selettivo. È inoltre possibile aggiungere lo 0,6% di estratto di lievito per favorire l'isolamento delle specie del genere Listeria, mentre l'aggiunta di cistina tellurite Y il sangue di agnello è l'ideale per Corynebacterium diphteriae.
Infine, il cloruro di sodio fornisce l'equilibrio osmotico al terreno e l'agar fornisce la consistenza solida..
Per preparare la trypticasein soy agar, è necessario pesare su una bilancia digitale 40 g del terreno commerciale disidratato. Si dissolve in un litro di acqua distillata contenuta in una beuta.
Si lascia riposare per 5 minuti e poi si porta su una fonte di calore per sciogliere il terreno. Dovrebbe essere mescolato frequentemente e bollito per 1 o 2 minuti. Successivamente, il terreno viene sterilizzato in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.
Lasciar raffreddare a 50 ° C e distribuire in piastre Petri sterili. Lasciar solidificare, capovolgere, disporre in finte e conservare in frigorifero.
Il pH finale del mezzo deve essere 7,3 ± 0,2.
Va notato che il colore del terreno di coltura disidratato è beige chiaro e deve essere conservato tra 10 e 35 ° C, in un luogo asciutto.
Da parte sua, l'agar preparato è di colore ambra chiaro. I piatti preparati devono essere conservati in frigorifero (2-8 ° C) fino al momento dell'uso..
Le piastre devono raggiungere la temperatura ambiente prima dell'uso.
L'agar sangue viene preparato aggiungendo il 5% di sangue defibrinato quando si raffredda l'agar triptico di soia a 50 ° C. La miscela viene omogeneizzata ruotando con movimenti delicati.
Servire in piastre Petri sterili. Il colore centrale dovrebbe essere rosso ciliegia.
Per preparare l'agar sangue a base di TSA, procedere come le procedure già descritte, ma quando si lascia l'autoclave, lasciarlo riposare fino a quando la temperatura del terreno è approssimativamente compresa tra 56 e 70 ° C. A quel punto il sangue viene posto e mescolato fino a quando il terreno diventa marrone..
Servire in piastre Petri sterili. Il colore del mezzo è marrone cioccolato.
La procedura di preparazione dell'agar è la stessa descritta per le piastre, con la differenza che invece di servire il terreno su piastre Petri, viene distribuito tra 10 e 12 ml in provette con coperchio in bachelite prima della sterilizzazione..
Successivamente, le provette vengono autoclavate a 121 ° C per 15 minuti. All'uscita si appoggiano con l'aiuto di un supporto e si lasciano solidificare.
I cunei preparati vengono seminati per superficie e servono a mantenere vitali alcuni microrganismi non esigenti per un periodo di tempo specificato..
Trypticasein Soy Agar viene utilizzato nei seguenti casi:
-Come base per la preparazione del classico agar sangue utilizzato di routine nella maggior parte dei laboratori.
-L'isolamento di batteri esigenti.
-Osservando il pattern di emolisi.
-Esecuzione di test diagnostici.
-Come base per preparare uno speciale agar sangue per Corynebacterium diphteriae, con cistina tellurite Y sangue di agnello.
-Come base per preparare agar sangue di agnello, più kanamicina-vancomicina per la crescita di anaerobi, in particolare Bacteroides sp.
-Per il mantenimento di ceppi non esigenti (Bacterioteca).
-Conta microbica aerobica nello studio del limite microbico di campioni di acqua, ambiente, alimenti e cosmetici.
I campioni possono essere seminati direttamente sulla superficie di Trypticasein Soy Agar integrato con sangue o altri additivi. Viene seminato per esaurimento.
Considerando che, le piastre di agar di soia tripticaseina senza additivi sono generalmente utilizzate per subcolturare ceppi microbici (batteri o lieviti)..
Per verificare la sterilità dei diversi terreni preparati con trypticasein soy base agar, si consiglia di effettuare le seguenti operazioni: da ciascun lotto preparato, 1 o 2 piastre o provette non inoculate devono essere incubate a 37 ° C per 24 ore per dimostrare la loro sterilità. In tutti i casi deve rimanere senza crescita.
Se viene rilevata una contaminazione, l'intero lotto deve essere scartato..
I seguenti ceppi batterici possono essere utilizzati per studiare il corretto funzionamento della tripticasi di soia agar: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus E se ne andò 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 e Enterococcus faecalis ATCC 29212.
I ceppi vengono seminati e incubati in aerobiosi a 37 ° C per 24 ore.
In tutti i casi la crescita deve essere soddisfacente.
Possono essere utilizzati anche funghi come Complex candida albicans ATCC 10231 e Aspergillus niger ATCC 16404. Si prevede una buona crescita per entrambi i ceppi.
I seguenti ceppi possono essere utilizzati per verificare il corretto funzionamento dell'agar sangue preparato con questa base: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 e Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Vengono seminate e incubate a 37 ° C in microaerofilia per 24 ore..
In tutti i casi, la crescita deve essere soddisfacente, tenendo conto che in S. pyogenes Deve essere osservata la beta-emolisi (alone chiaro intorno alla colonia) e in entrambi i ceppi di S. pneumoniae Si dovrebbe osservare alfa emolisi (alone verdastro attorno alle colonie).
Nessun utente ha ancora commentato questo articolo.