Agar sale e mannitolo Fondamento, preparazione e usi

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Jonah Lester

Il agar sale e mannitolo oppure il mannitolo salato è un terreno di coltura solido, selettivo e differenziale. È stato creato da Chapman per l'isolamento dei cocchi Gram positivi patogeni, in particolare Staphylococcus aureus.

Tuttavia, è anche utile per isolare Staphylococus epidermidis, che a volte può essere presente come un agente patogeno opportunistico, e Staphylococcus saprophyticus, riconosciuto patogeno urinario, tra le altre specie.

A. Fiola con terreno agar mannitolo salato preparato. B. Piastre di agar mannitolo salate seminate con ceppi batterici di mannitolo fermentanti e non fermentanti. Fonte: A e B: foto scattate dall'autore MSc. Marielsa gil.

Alcuni Enterococcus sono in grado di crescere su questo terreno, così come certi bastoncelli sporigeni Gram positivi..

Questo terreno è molto utile nell'analisi di campioni clinici, ma è anche utilizzato nello studio microbiologico degli alimenti e nel controllo di qualità di prodotti industriali, come cosmetici, medicinali, tra gli altri..

Salty Mannitol Agar è composto da estratti e peptoni di carne di manzo, triptein, mannitolo, cloruro di sodio, rosso fenolo e agar.

Indice articolo

  • 1 Razionale
  • 2 Preparazione
  • 3 usi
  • 4 Controllo di qualità
  • 5 Considerazioni finali
  • 6 Riferimenti

Base

L'agar mannitolo è selettivo grazie alla sua alta concentrazione di sale. La salinità agisce come una sostanza inibitoria e previene la crescita dei batteri Gram negativi.

È anche differenziale a causa della presenza del carboidrato mannitolo e dell'indicatore di pH rosso fenolo. Da questo, i batteri in grado di fermentare il mannitolo producono acidi, acidificando il terreno, ingiallendo le colonie e il terreno..

D'altra parte, le colonie che non fermentano il mannitolo crescono nel terreno assumendo i nutrienti forniti dagli estratti di carne, dai peptoni e dalla triptein. Da lì i batteri estraggono il carbonio, l'azoto, le vitamine ei minerali necessari alla loro crescita..

Le colonie in questo caso possono essere rosa debole o forte e il terreno rimane dello stesso colore o cambia in fucsia.

L'agar è la sostanza che fornisce la consistenza al terreno.

Preparazione

Per preparare un litro di agar mannitolo salato, si pesano 111 g del terreno disidratato della società commerciale preferita e si sciolgono in 1000 ml di acqua distillata, utilizzando un pallone..

Il calore viene applicato con frequenti agitazioni del mezzo per migliorare il processo di dissoluzione. Bollire per un minuto.

Porre il matraccio nell'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Al termine del tempo togliere il matraccio dall'autoclave, lasciarlo riposare e servire tra 15 e 20 ml su piastre Petri sterili quando la temperatura è di circa 50-55 ° C..

Si lascia solidificare ordinando capovolto in plaqueros e conservando in frigorifero fino al momento dell'uso. Prima di seminare un campione, attendere che la piastra raggiunga la temperatura ambiente.

I piatti vengono seminati mediante striatura o semina superficiale con spatola drigalski. Il pH finale del terreno preparato deve essere 7,4 ± 0,2

Il colore del terreno disidratato è beige chiaro e il colore del terreno preparato è rosso arancio.

Applicazioni

Grazie alla sua elevata selettività, questo terreno è ideale per la semina di campioni con flora mista in cui si desidera ricercare la presenza di Staphylococus aureus, come il principale agente patogeno di questo genere.

In questo senso, uno dei suoi usi più frequenti è nell'analisi microbiologica di essudati faringei e campioni di secrezioni nasali, soprattutto per rilevare portatori asintomatici di S. aureus.

Alcuni paesi hanno implementato questa analisi come requisito obbligatorio per le persone che vogliono lavorare come venditori di cibo..

Questo controllo impedisce l'assunzione di vettori di S. aureus, evitando così un'intossicazione alimentare massiccia, a causa del consumo di alimenti contaminati da enterotossina stafilococcica.

Può anche essere incluso nella semina di infezioni di ferite, emocolture, liquido cerebrospinale, lavaggio broncoalveolare, tra gli altri.

L'agar mannitolo salato è utile per isolare nuovamente le colonie da colture di urina da agar CLED o agar sangue il cui Gram ha rivelato cocchi Gram positivi in ​​cluster..

È anche valido nell'analisi microbiologica di alimenti, acqua potabile, suolo, tra le altre applicazioni..

QA

Una volta preparato un lotto di piastre con agar mannitolo salato, si consiglia di eseguire un controllo di qualità. I ceppi di controllo vengono seminati per mostrare se c'è o meno una crescita degli stessi.

Come controllo positivo, ceppi noti di Staphylococcus aureus. Dovrebbe crescere in modo soddisfacente sviluppando colonie gialle e anche il terreno assume lo stesso colore.

Allo stesso modo, è conveniente includere un ceppo noto di Staphylococcus epidermidis. Dovrebbe crescere in modo soddisfacente sviluppando colonie rosa e il terreno rimane dello stesso colore o si scurisce fino a diventare un rosa più intenso.

Come controllo negativo, vengono utilizzati ceppi che non dovrebbero crescere su questo terreno. Ad esempio, un noto ceppo di Escherichia coli o Klebsiella pneumoniae. Il risultato atteso è una completa inibizione, cioè nessuna crescita..

Inoltre, è necessario incubare una piastra non inoculata. In esso non dovrebbe esserci crescita o cambiamento di colore.

È importante che la piastra non venga utilizzata se ci sono segni di deterioramento, come contaminazione, disidratazione, scolorimento, tra gli altri.

Pensieri finali

Quando si utilizza un mezzo agar salato al mannitolo, ci sono alcuni aspetti importanti da considerare:

-Ottenere una crescita di colonie gialle non indica che lo sia Staphylococcus aureus. Va ricordato che alcuni ceppi di Enterococcus sono in grado di crescere in questo terreno e di fermentare il mannitolo, così come certi bastoncelli sporigeni Gram positivi..

Pertanto, è importante eseguire un Gram sulla colonia e un test della catalasi..

-D'altra parte, si deve considerare che altre specie di Staphylococcus diverse da aureola sono anche in grado di fermentare il mannitolo. Pertanto, è importante sottoporre la colonia a un brodo nutritivo da prelevare da lì ed eseguire il test della coagulasi..

Tra le specie di Staphylococcus di rilevanza clinica per l'uomo che fermentano il mannitolo ci sono: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, tra gli altri.

Altri possono dare una reazione variabile, cioè, a volte positiva e talvolta negativa. Alcuni sono S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, tra l'altro.

-Si sconsiglia di prelevare colonie direttamente dall'agar mannitolo per eseguire il test della coagulasi, poiché l'elevata concentrazione di sale del terreno può interferire con il risultato..

-Infine, si consiglia di incubare le piastre seminate con mannitolo salato fino a 48 ore, poiché alcuni ceppi di S. aureus può fermentare lentamente il mannitolo, sebbene questo sia raro.

Riferimenti

  1. Britannia Laboratories. Agar salato al mannitolo. 2015 Disponibile su: britanialab.com
  2. "Agar mannitolo salato". Wikipedia, l'enciclopedia libera. 31 ottobre 2018, 19:08 UTC. 17 gennaio 2019, 20:55, disponibile su: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. (5a ed.). Argentina, Editoriale Panamericana S.A.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 ed. Argentina. Editoriale Panamericana S.A
  5. BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013, disponibile su: bd.com.

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