Il Agar BHI Brain Heart Infusion Agar è un terreno di coltura solido e nutriente. In spagnolo lo chiamiamo agar per infusione di cervello e cuore. È un terreno di coltura non selettivo, il che significa che possono svilupparsi tutti i tipi di batteri Gram positivi e Gram negativi, nonché alcuni lieviti e funghi filamentosi..
È composto da un infuso di cervello e cuore di manzo, idrolizzato peptico da tessuti animali, idrolizzato pancreatico di caseina, cloruro di sodio, glucosio, fosfato disodico e agar..
Va notato che l'agar BHI è uno dei terreni di coltura più utilizzati nei laboratori di batteriologia. Può essere utilizzato senza integratori come coltura primaria, sottocultura di colonie ottenute su altri terreni selettivi o per il mantenimento di ceppi in laboratorio.
D'altra parte, è un terreno ideale da utilizzare come base nella preparazione di terreni arricchiti, come agar sangue e agar cioccolato. Entrambi ideali per isolare microrganismi esigenti dal punto di vista nutrizionale. Tuttavia, va notato che poiché contiene glucosio non è adatto per l'osservazione dei modelli di emolisi..
Allo stesso modo, l'agar BHI può essere utilizzato per la preparazione di terreni speciali per l'isolamento di microrganismi patogeni difficili da coltivare in terreni comuni, tra cui: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae e Histoplasma capsulatum.
Con l'additivo antibiotico, l'agar BHI diventa un terreno selettivo per l'isolamento dei funghi.
Indice articolo
È un terreno di coltura nutriente per isolare microrganismi moderatamente esigenti e il suo arricchimento può essere aumentato con l'aggiunta di sangue e altri integratori alimentari..
È un terreno di coltura non selettivo, quindi consente la crescita della maggior parte dei batteri Gram positivi e Gram negativi, nonché di alcuni funghi. Tuttavia, può diventare selettivo con l'aggiunta di antibiotici..
Il terreno contiene cervello di manzo e infuso di cuore, idrolizzato peptico di tessuto animale e idrolizzato di caseina pancreatica; tutti questi composti agiscono come fonti di vitamine, amminoacidi, azoto e carbonio.
Il glucosio è un carboidrato che fornisce energia ai microrganismi una volta che lo hanno fermentato. Nel frattempo, il cloruro di sodio e il fosfato disodico mantengono l'equilibrio osmotico e forniscono un pH vicino alla neutralità. Infine, l'agar conferisce la consistenza solida al terreno.
Pesare 52 grammi del mezzo disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Portare la miscela a una fonte di calore fino all'ebollizione, mescolando frequentemente durante il processo di dissoluzione..
Le piastre o i cunei di agar BHI possono essere preparati senza additivi.
Per la preparazione degli spicchi servire il preparato fino a riempire metà di ogni provetta, coprire e sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti, quando si lasciano adagiare su una base finché non si solidificano. Successivamente conservare in frigorifero fino al momento dell'uso.
La miscela disciolta viene sterilizzata in autoclave a 121 ° C per 15 minuti, lasciando raffreddare a 50 ° C e 20 ml del terreno vengono serviti in piastre Petri sterili. Si lasciano solidificare, si capovolgono e si conservano in frigorifero fino al momento dell'uso. Lasciare che i piatti raggiungano la temperatura ambiente prima di seminare.
Il pH del mezzo deve rimanere a 7,4 ± 0,2.
Il terreno non preparato è di colore beige e preparato è di colore ambra chiaro.
Dopo aver sterilizzato il terreno, raffreddare a una temperatura di circa 45-50 ° C, quindi aggiungere il sangue (50 ml), mescolare delicatamente per omogeneizzare e servire in modo asettico 20 ml in ciascuna capsula Petri. Se sul piatto si formano delle bolle, la fiamma più leggera deve essere passata velocemente sulle bolle per eliminarle.
Allo stesso modo, è possibile preparare terreni speciali aggiungendo gli additivi corrispondenti quando la miscela raggiunge una temperatura compresa tra 45 e 50 ° C..
Il centro è rosso ciliegia.
L'agar BHI senza additivi è utile come coltura primaria e per la semina di ceppi puri di microrganismi a bassa o media esigenza per la loro successiva identificazione..
Essendo un mezzo di colore chiaro, è ideale per l'osservazione dei pigmenti e, non contenendo sostanze interferenti, su di esso possono essere eseguiti alcuni test biochimici, come ossidasi e catalasi, oppure possono essere montati altri test biochimici da colonie da questo agar.
Allo stesso modo, i cunei di agar BHI sono ampiamente utilizzati per il mantenimento dei ceppi per un certo periodo in laboratorio (batterioteca).
Le piastre o i cunei seminati in superficie con ceppi batterici vengono incubati a 37 ° C per 24-48 ore. Considerando che, nei funghi, la temperatura e il tempo di incubazione dipenderanno dal tipo di fungo che si sta cercando..
Con questa base puoi preparare terreni arricchiti e selettivi.
La sua funzione principale è quella di servire come base nella preparazione di agar sangue per l'uso di routine nei laboratori di microbiologia. In particolare, la base BHI favorisce l'isolamento dei ceppi di Streptococcus sp. Tuttavia, ha lo svantaggio di non essere adatto per l'osservazione dei pattern di emolisi perché contiene glucosio..
Viene anche utilizzato nella preparazione di agar sangue di coniglio o di cavallo per l'isolamento di Haemophilus sp. Per risultati migliori, è possibile aggiungere un integratore di arricchimento (IsoVitaleX).
Se i campioni provengono dalle vie respiratorie all'agar, è possibile aggiungere bacitracina per inibire la flora di accompagnamento e aumentare la probabilità di recupero dei ceppi di Haemophilus sp.
D'altra parte, l'agar sangue (di agnello o umano) con tellurite di cistina può essere preparato per isolare Corynebacterium diphtheriae. Allo stesso modo, è utile preparare agar sangue di coniglio, con l'aggiunta di cistina e glucosio per l'isolamento di Francisella tularensis.
Le piastre di agar sangue vengono seminate per esaurimento e incubate a 35-37 ° C per 24-48 ore in microaerofilia (5-10% CODue).
Questo terreno con l'aggiunta di antibiotici può sostituire l'agar Sabouraud per l'isolamento dei funghi..
La combinazione di agar BHI con cloramfenicolo - gentamicina o penicillina -, streptomicina e sangue di cavallo è ideale per l'isolamento di Histoplasma capsulatum.
A seconda del microrganismo da isolare, si consiglia l'incubazione a 35-37 ° C oa temperatura ambiente in aerobiosi. A volte è necessaria l'incubazione in entrambi gli intervalli di temperatura, utilizzando 2 piastre per questo..
Ad alcuni funghi piace Trichophyton mentagrophytes deve essere incubato a temperatura ambiente per un massimo di 7 giorni.
Da ogni lotto preparato, si consiglia di incubare 1 piastra o cuneo a 37 ° C per 24 ore e verificare che non vi sia crescita; particolarmente importante quando si prepara l'agar sangue, poiché è un terreno facilmente contaminato.
D'altra parte, la qualità del terreno può essere valutata inoculando ceppi standard noti o certificati e osservando il loro sviluppo..
In questo senso, per valutare BHI agar senza additivi, ceppi di Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 o candida albicans ATCC 10231. Incubare a 37 ° C in aerobiosi per 24-48 ore. Si prevede una crescita soddisfacente in tutti i casi.
Per valutare piastre di agar sangue, ceppi di Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 o Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.
I ceppi batterici vengono incubati a 37 ° C in microaerofilia per 24 ore, mentre il fungo viene incubato a temperatura ambiente in una camera umida per un massimo di 7 giorni. Si prevede una crescita soddisfacente in tutti i casi.
Nessun utente ha ancora commentato questo articolo.