Il peptone acqua È un terreno di arricchimento liquido e non selettivo, utilizzato principalmente come diluente per campioni di alimenti o altri materiali. Questo mezzo dal punto di vista chimico è molto semplice, contiene peptone di carne, cloruro di sodio e acqua..
Ha un certo valore nutritivo, permettendo di arricchire il campione. Se sono presenti batteri maltrattati, questo terreno ha il potere di riparare la vitalità. È particolarmente utile nel recupero dei batteri appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriaceae..
Nel caso del recupero delle Salmonelle, si consiglia l'utilizzo della variante di acqua peptonata tamponata; Questo serve come mezzo di pre-arricchimento per il campione, in questo caso contiene altri elementi come fosfato disodico e fosfato dipotassico..
Normalmente l'acqua peptonica viene preparata a pH neutro, tuttavia esistono altre varianti in cui è necessario che il pH sia 8,5 ± 0,2 (alcalino), perché il batterio da isolare è alcalino, come Vibrio cholerae.
Inoltre, questo terreno può essere utilizzato come terreno di base per i test di fermentazione dei carboidrati..
Indice articolo
I peptoni forniscono i nutrienti necessari per la crescita batterica, in particolare l'azoto e gli amminoacidi a catena corta, mentre il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico..
Inoltre, il terreno consente di disperdere, omogeneizzare e riparare le cellule batteriche che sono state danneggiate dai processi industriali..
Come diluente è ideale, in grado di sostituire efficacemente la soluzione fisiologica (SSF) o la soluzione tampone fosfato (PBS).
La crescita batterica è evidente osservando la sua torbidità..
Pesare 1 g di peptone e 8,5 g di cloruro di sodio, sciogliere in 1 litro di acqua distillata. Il pH dovrebbe essere regolato a 7,0. Per questo, può essere utilizzato 1 N cloruro di sodio..
Pesare 15 g del terreno disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Omogeneizzare la miscela. Se necessario si fa bollire la miscela per 1 minuto per favorire la totale dissoluzione. Servire in flaconi da 100 ml o tubi da 10 ml secondo necessità. Autoclave a 121 ° C per 15 minuti.
Raffreddare e utilizzare o conservare in frigorifero. Il pH finale del mezzo è 7,2 ± 0,2.
Il colore del terreno disidratato è beige chiaro e il terreno preparato è ambra chiaro.
Alla precedente preparazione -prima della sterilizzazione- il carboidrato deve essere aggiunto ad una concentrazione finale dell'1%, più l'indicatore Andrade (fucsina acida) o rosso fenolo (0,018 g / L). I tubi devono essere dotati di una campana Durham per osservare la formazione di gas.
Contiene idrolizzato enzimatico di caseina, sodio cloruro, fosfato diidrogeno potassio e sodio idrogeno fosfato dodecaidrato. Il pH finale è 7,0 ± 0,2.
Per la sua preparazione, pesare 20 g del terreno disidratato e sciogliere in 1 litro di acqua distillata. Lascia riposare per circa 5 minuti. Riscaldare per 1 minuto fino a completa dissoluzione.
Versare in barattoli adatti secondo necessità. Sterilizzare utilizzando l'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.
Pesare 25 g del terreno disidratato e sciogliere in 1 litro d'acqua. Procedi come descritto sopra. Il pH varia da 8,3 a 8,7.
L'inoculo viene effettuato posizionando direttamente il campione.
Viene utilizzato per diluire i campioni, soprattutto quando si sospetta che possano essere presenti batteri danneggiati. Di solito le diluizioni sono 1:10 e 1: 100.
Incubare per 24 ore in aerobiosi a 35-37 ° C.
Per i campioni di feci alla ricerca di Salmonella, si raccomanda l'uso di acqua tamponata o tamponata come mezzo di pre-arricchimento..
Per fare ciò, procedere come segue:
Se si formano le feci, prelevare 1 g di campione. Se sono liquidi, prendi 1 ml di feci e sospendili in una provetta con 10 ml di acqua peptone sbattuta. Per i tamponi rettali, scaricare il materiale del tampone nella provetta con acqua peptonata tamponata.
In tutti i casi, mescolare e omogeneizzare molto bene il campione..
Incubare a 37 ° C per 18-24 ore. Successivamente subcoltura in un brodo di arricchimento come il brodo di cistina selenite o brodo tetrationato a 37 ° C per altre 18-24 ore. Infine, coltivare in terreni selettivi per Salmonella, come SS agar, XLD agar, Hektoen agar, tra gli altri..
L'acqua peptone viene utilizzata come mezzo di arricchimento o come semplice diluente, ma se si cercano specie di Salmonella, viene utilizzata come mezzo di pre-arricchimento, come già descritto..
Nel cibo procedere come segue:
Per i cibi solidi pesare 25 g del campione e per i liquidi misurarne 25 ml. Porre detta porzione in beute contenenti 225 ml di acqua peptone. Mescolare e omogeneizzare il campione.
Se si sospetta che la carica microbica sia elevata, è possibile eseguire diluizioni seriali o decimali per facilitare il conteggio delle unità formanti colonie (CFU)..
Il numero di diluizioni dipenderà dal tipo di campione e dall'esperienza dell'analista..
Se, al contrario, si sospetta che la carica microbica sia molto bassa, non è necessario effettuare diluizioni. Successivamente, subcoltura su terreni selettivi.
Nel caso di cibo dal mare, come crostacei, pesce, tra gli altri, in cerca di Vibrio cholerae o altre specie Vibrio, deve essere utilizzata acqua peptone regolata a pH 8,5 (acqua peptone alcalina).
Da ogni lotto preparato, una o due provette devono essere incubate senza inoculo per 24 ore in aerobiosi a 37 ° C. Alla fine del tempo non si dovrebbero osservare torbidità o cambiamenti di colore.
I ceppi di controllo noti possono essere utilizzati anche per valutare la loro efficacia:
Per questo possono essere utilizzati i seguenti ceppi batterici: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus E se ne andò 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
In tutti i casi, è previsto uno sviluppo microbico soddisfacente, osservato dalla torbidità del terreno..
-Il terreno disidratato è molto igroscopico, quindi deve essere tenuto lontano dall'umidità.
-Il mezzo non deve essere utilizzato se si osserva un qualsiasi tipo di deterioramento.
-Il terreno di coltura disidratato deve essere conservato a una temperatura compresa tra 10 e 35 ° C
-Il terreno preparato deve essere conservato in frigorifero (2-8 ° C).
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