Il Agar Vogel-Johnson è un terreno di coltura solido, selettivo e differenziale, appositamente formulato per l'isolamento di Staphylococcus aureus. Questo terreno è stato creato da Vogel e Johnson nel 1960 dalla modifica dell'agar tellurite glicina formulata nel 1955 da Zebovitz, Evans e Niven..
La modifica consisteva nell'aumentare la concentrazione di mannitolo presente nel mezzo e nell'incorporare un indicatore di pH. La formula attuale è composta da triptein, estratto di lievito, mannitolo, fosfato dipotassico, cloruro di litio, glicina, rosso fenolo, agar, soluzione di tellurite di potassio all'1% e acqua..
Va notato che ci sono altri terreni che, come l'agar Vogel-Johnson, sono selettivi per l'isolamento di S. aureus, come l'agar salato al mannitolo e l'agar Baird Parker. In questo senso, si potrebbe dire che la base dell'agar Vogel-Johnson è una miscela di agar salato al mannitolo e agar Baird Parker..
Nella prima le colonie di S. aureus Si distinguono facendo fermentare il mannitolo e facendo diventare giallo l'indicatore di pH. D'altra parte, nel secondo il file S. aureus è caratterizzato dalla riduzione della tellurite a tellurio e dalla formazione di colonie da grigie a nere. Entrambe le proprietà sono state osservate nell'agar Vogel-Johnson..
Questo mezzo, come le sue controparti, è utile per il rilevamento di Staphylococcus aureus in campioni alimentari, controlli sanitari di prodotti industriali e campioni clinici.
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Il terreno Vogel-Johnson contiene triptein ed estratto di lievito; Entrambe le sostanze forniscono aminoacidi a catena lunga che fungono da fonti di carbonio e azoto necessari per la crescita batterica. I batteri in grado di crescere in questo terreno prenderanno i nutrienti da queste sostanze..
L'agar Vogel-Johnson è in grado di inibire la crescita di batteri Gram negativi e anche di alcuni batteri Gram positivi, favorendo lo sviluppo di stafilococchi coagulasi positivi. Le sostanze inibitorie sono il tellurito di potassio, il cloruro di litio e la glicina..
Le sostanze che compongono questo terreno differenziale sono il mannitolo e la tellurite di potassio. Il mannitolo è un carboidrato, e quando viene fermentato si producono acidi che fanno virare il mezzo da rosso a giallo, cosa che avviene grazie alla presenza dell'indicatore di pH fenolo rosso..
Considerando che, la tellurite incolore quando è ridotta a tellurio metallico libero, assume un colore da grigio scuro a nero..
Il Staphylococcus aureus fermenta il mannitolo e riduce la tellurite a tellurio. Ecco perché le tipiche colonie di S. aureus in questo mezzo sono grigi o neri circondati da un mezzo giallo.
I batteri che crescono in questo terreno e non riducono la tellurite o fermentano il mannitolo, formeranno colonie trasparenti circondate da un mezzo di colore rosso, anche più intenso del colore originale, a causa dell'alcalinizzazione del terreno mediante l'uso di peptoni.
D'altra parte, i batteri che riducono la tellurite ma non fermentano il mannitolo cresceranno come colonie grigie o nere circondate da un mezzo rosso intenso..
Se il terreno fosse preparato senza l'aggiunta di tellurite di potassio, colonie di S. aureus si svilupperebbero come colonie gialle, circondate da un terreno giallo, come nell'agar salato del mannitolo.
Il fosfato dipotassico mantiene l'equilibrio osmotico del terreno e regola il pH portandolo alla neutralità. 7.2. Mentre l'agar conferisce la consistenza solida al terreno di coltura.
Questa soluzione non è inclusa nel mezzo disidratato, poiché non può essere sterilizzata in autoclave. Per questo motivo viene preparato separatamente e aggiunto al terreno già sterilizzato..
Alcune case commerciali vendono la soluzione pronta per l'uso di tellurite di potassio all'1%. Se vuoi prepararti in laboratorio, procedi come segue:
Pesare 1,0 g di tellurite di potassio e misurare 100 ml di acqua distillata. Sciogliere la tellurite di potassio in una parte di acqua e quindi completare la quantità di acqua fino a raggiungere i 100 ml. Sterilizzare la soluzione con il metodo di filtrazione.
Pesare 60 g di terreno disidratato e sciogliere in 1 litro di acqua distillata. La miscela viene riscaldata a ebollizione per favorire la completa dissoluzione. Durante il processo di dissoluzione il mezzo viene agitato frequentemente.
Sterilizzare in autoclave a 15 libbre di pressione e 121 ° C per 15 minuti. Togliere dall'autoclave e lasciar riposare fino a quando il terreno non raggiunge una temperatura di circa 45-50 ° C. Aggiungere 20 ml della soluzione di tellurite di potassio all'1% preparata in precedenza.
Mescolare e versare in piastre Petri sterili. Lasciar solidificare e ordinare capovolto su portapiatti per poi riporlo in frigorifero fino al momento dell'uso.
Il pH finale del terreno preparato deve essere 7,2 ± 0,2.
Prima di seminare un campione, attendere che la piastra raggiunga la temperatura ambiente..
Il colore del terreno preparato è rosso.
Sebbene possa essere utilizzato per l'isolamento di S. aureus in qualsiasi tipologia di campione viene utilizzato principalmente per l'analisi microbiologica di prodotti farmaceutici, cosmetici e alimentari.
Si raccomanda che l'inoculo sia denso. La semina può essere effettuata per striatura con manico in platino o per superficie con spatola Drigalski.
Le piastre vengono incubate a 35-37 ° C per 24-48 ore in aerobiosi.
I seguenti ceppi di controllo possono essere utilizzati per eseguire il controllo di qualità sul terreno Vogel-Johnson:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus E se ne andò 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 o Proteus mirabilis ATCC 43071.
Il risultato atteso è il seguente: per i ceppi di S. aureus Crescita soddisfacente con colonie nere circondate da terreno giallo. In modo da S. epidermidis crescita regolare con colonie traslucide o nere circondate da terreno rosso.
Allo stesso modo, per E. coli è prevista un'inibizione totale, e per Proteus mirabilis inibizione parziale o totale; se cresce, lo farà con parsimonia e le colonie saranno nere circondate dalla metà rossa.
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