Il Agar Salmonella-Shigella noto anche come SS agar, è un terreno moderatamente selettivo e differenziale, appositamente progettato per l'isolamento di batteri enteropatogeni dei generi Salmonella e Shigella, sia da campioni ambientali che clinici..
L'agar SS ha una composizione complessa; È composto da estratto di carne, peptone, lattosio, sali biliari, citrato di sodio, tiosolfato di sodio, citrato ferrico, agar, rosso neutro, verde brillante e acqua distillata. Data la sua grande selettività si possono seminare campioni con abbondante flora mista..
Nei laboratori di microbiologia, il terreno Salmonella-Shigella è ampiamente utilizzato per indagare la presenza di Salmonella e Shigella in campioni di feci diarroiche, acque reflue, acqua potabile e alimenti..
A volte è necessario utilizzare brodo di pre-arricchimento (brodo di lattosio) e brodo di arricchimento (brodo di cistina di selenite) per recuperare i ceppi di Salmonella.
Questi passaggi sono necessari quando si sospetta l'esistenza di Salmonella in quantità molto bassa, o dove il ceppo può essere abusato da processi di produzione industriale, principalmente alimenti trasformati. Si consiglia inoltre di arricchire i campioni di feci di pazienti che sono stati trattati con antibiotici..
Successivamente, il brodo arricchito può essere seminato su agar Salmonella-Shigella e altri terreni simili, come agar xilosio, lisina desossicolato (XLD) e agar enterico Hektoen (HE)..
Indice articolo
Ogni componente del terreno di coltura Salmonella-Shigella ha una funzione specifica e la miscela nel suo insieme gli conferisce le proprietà che lo caratterizzano..
L'estratto di carne e il peptone (digerito con caseina e tessuto animale) forniscono i nutrienti necessari (nitrogeni, carbonio e vitamine) per lo sviluppo di microrganismi in grado di tollerare il resto dei componenti..
L'agar-agar ha il compito di fornire la consistenza solida al terreno.
Questo terreno è altamente selettivo perché contiene sali biliari, citrato di sodio e verde brillante. Pertanto, inibisce la crescita di tutti i batteri Gram positivi e della maggior parte dei bacilli Gram negativi, inclusi alcuni coliformi..
Mentre i batteri del genere Salmonella e alcuni ceppi di Shigella supportano questi composti.
Principalmente, il genere Salmonella è molto resistente ai sali biliari, tanto da essere in grado di vivere nella cistifellea di alcuni pazienti portatori che perdono costantemente i batteri nelle feci..
Il lattosio è il carboidrato fermentabile che aiuta a differenziare i ceppi fermentanti il lattosio da quelli non fermentanti. Questa proprietà è evidenziata dalla presenza dell'indicatore di pH, che in questo terreno è rosso fenolo.
I ceppi fermentanti il lattosio danno colonie rosse, mentre i ceppi non fermentanti sono incolori. Questa caratteristica è importante, poiché Salmonella e Shigella non fermentano il lattosio..
D'altra parte, questo terreno contiene tiosolfato di sodio come fonte di solfuro e citrato ferrico come fonte di ferro. Entrambi i composti sono in grado di differenziare i batteri in grado di produrre idrogeno solforato. Questi reagiscono per formare un precipitato di solfuro ferrico nero insolubile e visibile..
Questa proprietà si trova in alcuni ceppi del genere Salmonella. Normalmente le loro colonie sono piatte e incolori con un punto nero al centro. Il resto delle Salmonelle non produce H.DueS e si sviluppano come colonie incolori.
D'altra parte, le colonie del genere Shigella sono piatte incolori senza annerimenti..
Questo mezzo è molto semplice da preparare.
Pesare 63 g del terreno commerciale disidratato e sciogliere in un litro di acqua distillata. Riscalda la soluzione e mescola. La miscela può bollire fino a pochi minuti.
Questo mezzo non deve essere autoclavato. Dopo la dissoluzione va servito direttamente su piatti sterili singoli o doppi..
Quando si solidificano, vengono disposte capovolte in placche e conservate in frigorifero (2-8 ° C) fino al momento dell'uso..
Il terreno dopo la preparazione deve essere a pH 7,2 ± 0,2 e con un colore rosso-arancio..
È importante lasciare che le piastre si riscaldino prima di seminare i campioni. Il campione originale può essere seminato direttamente, scaricando il materiale su una parte dell'agar e quindi strisciando per esaurimento da lì.
In caso di utilizzo di brodi arricchiti, passare una porzione del brodo di selenite e seminare con spatola drigalski.
Incubare a 37 ° C per 24 ore in aerobiosi.
Si deve tenere conto del fatto che il numero di grammi da pesare e il pH finale del mezzo possono variare da una casa commerciale all'altra. La base centrale porta sempre le indicazioni per la sua preparazione.
Viene spesso utilizzato nell'analisi della coltura delle feci e nello studio microbiologico di acque reflue, acqua potabile e campioni di cibo..
Spesso vengono preparate piastre doppie, da un lato si posiziona l'agar Salmonella-Shigella e dall'altro l'agar XLD.
-Alcuni ceppi di Shigella non crescono su questo terreno. Pertanto, non è raccomandato per l'isolamento primario di questo genere..
-Non tutte le colonie trasparenti con un centro nero sono indicative di Salmonella; Devono essere eseguiti test biochimici per effettuare una corretta identificazione, poiché le colonie di alcuni ceppi di Proteus sono indistinguibili da quelle di Salmonella.
-Il terreno disidratato deve essere curato dall'esposizione all'ambiente, poiché è molto igroscopico. Pertanto, deve essere conservato in un ambiente asciutto e ben chiuso. Aperto per brevissimi periodi.
-Nel tempo i sali biliari nel terreno possono precipitare, formando un'immagine simile a un tappeto all'interno dell'agar, ma ciò non influisce sui risultati..
-Alcuni ceppi di Shigella possono fermentare lentamente il lattosio.
Per dimostrare che il terreno funziona correttamente, si consiglia di piantare ceppi di controllo noti o certificati e osservare se la crescita soddisfa le caratteristiche previste..
Per questo puoi usare ceppi di E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.
I risultati attesi sono:
Escherichia coli --colonie convesse rosa.
Enterobacter e Klebsiella- grandi colonie e mucoidi rossi o rosa.
Shigella flexneri --colonie piatte chiare o incolori.
Salmonella typhimurium - colonie incolori con centro nero.
Enterococcus faecalis-- inibizione totale.
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