Il brodo tetrationato o TT brodo è un terreno di coltura liquido selettivo per l'arricchimento e il recupero di ceppi del genere Salmonella. È stato creato da Müeller e successivamente modificato da Kauffmann, ecco perché c'è chi lo chiama brodo Müeller-Kauffmann.
Il terreno originale conteneva peptoni proteici, carbonato di calcio e tiosolfato di sodio. Kauffmann ha aggiunto sali biliari e ha creato un'altra modalità con un verde brillante. Queste sostanze inibiscono la crescita dei coliformi, lasciando il terreno libero per lo sviluppo di batteri patogeni, in questo caso Salmonella.
La modifica ha avuto molto successo perché ha aumentato notevolmente la sensibilità del mezzo. Per questo motivo è attualmente utile per la ricerca di Salmonelle in qualsiasi tipo di campione, ma soprattutto per feci e alimenti solidi o liquidi..
La sua preparazione consiste in due fasi; il mezzo commerciale è una base per preparare il brodo tetrationato, e successivamente in modo che il tetrationato possa essere formato una soluzione di iodio iodato viene aggiunta per completare il mezzo.
L'American Public Health Association (APHA) raccomanda l'uso di brodo tetrationato integrato con verde brillante per l'arricchimento dei campioni di Salmonella, poiché è più selettivo del brodo tetrationato e del brodo di selenite..
In generale, il brodo tetrationato è ideale quando si sospetta la presenza di batteri del genere Salmonella in piccole quantità o quando vengono abusati dall'esposizione a sostanze inibitorie o da processi industriali che riducono al minimo la loro vitalità..
Indice articolo
I peptoni presenti corrispondono al digerito pancreatico di caseina e al digerito peptico del tessuto animale. Questi forniscono la fonte di carbonio, azoto e nutrienti generali per la crescita batterica..
Da parte sua, il tiosolfato di sodio reagisce con la soluzione iodata per formare il tetrationato. Questo inibisce la crescita dei coliformi e favorisce lo sviluppo di batteri che contengono l'enzima tetrationato reduttasi, tra questi c'è il genere Salmonella, ma anche Proteus.
I sali biliari agiscono anche come sostanza inibitoria per la maggior parte dei batteri Gram positivi e alcuni Gram negativi (coliformi)..
Il carbonato di calcio assorbe le sostanze tossiche generate dalla decomposizione del tetrationato, che forma acido solforico. In questo senso, il carbonato di calcio neutralizza l'acidità, mantenendo stabile il pH del mezzo..
Nel caso della modalità verde brillante, questa sostanza aumenta il potere selettivo del brodo tetrationato inibendo microrganismi diversi dal genere Salmonella..
Pesare:
Lo ioduro di potassio viene sciolto in circa 5 ml di acqua distillata sterile, quindi si aggiunge poco a poco lo iodio mentre la miscela viene riscaldata. Dopo che si è completamente sciolto, portare a volume con acqua distillata sterile fino a raggiungere un volume finale di 20 ml..
Pesare 46 grammi di terreno disidratato e sospendere in 1 litro di acqua distillata sterile. Mescolare e scaldare fino a completo scioglimento, può portare a ebollizione solo per pochi minuti. Non sterilizzare in autoclave. La base del mezzo viene lasciata raffreddare a circa 45 ° C e in quel momento vengono aggiunti 20 ml della soluzione iodata..
Dopo aver aggiunto la soluzione di ioduro al terreno, deve essere utilizzata immediatamente. Se non vuoi utilizzare l'intera miscela, procedi come segue:
10 ml del terreno di base vengono distribuiti nelle provette e solo a quelle da inoculare con i campioni si aggiungono 0,2 ml della soluzione iodata..
Quelli che non verranno utilizzati possono comunque essere conservati in frigorifero, tuttavia, poiché il terreno non è sterilizzato, l'ideale è preparare l'esatta quantità necessaria..
Il colore del terreno prima di aggiungere la soluzione di iodio iodio è bianco latte con un precipitato bianco e dopo l'aggiunta è marrone con un precipitato denso. Il precipitato osservato è normale e corrisponde al carbonato di calcio che non si dissolve. Il pH finale del mezzo è 8,4 ± 0,2.
Per preparare il brodo tetrationato verde brillante si eseguono tutti i passaggi sopra descritti, ma in aggiunta si aggiungono alla miscela 10 ml della soluzione verde brillante preparata allo 0,1%..
Questa soluzione è preparata come segue:
Pesare 0,1 g di verde brillante e sospendere in 100 ml di acqua distillata. Riscaldare a ebollizione per ottenere la completa dissoluzione. Conservare in bottiglia color ambra.
Per i campioni di feci (coltura di feci) il protocollo è il seguente:
Inoculare 1 g di feci solide o 1 ml di feci liquide in una provetta con 10 ml di brodo tetrationato pronto per l'uso. Agitare vigorosamente e incubare in aerobiosi a 43 ° C per 6-24 ore.
Successivamente, prelevare un'aliquota da 10 a 20 µl di brodo e subcoltura in un terreno selettivo per Salmonella, come agar SS, agar XLD, agar verde brillante, agar enterico Hektoen, tra gli altri..
Parallelamente, i terreni selettivi per Salmonella devono essere inoculati con il campione diretto (feci) senza arricchimento. Per i campioni con tampone rettale, scaricare il materiale raccolto nella provetta e procedere come descritto sopra..
Per i campioni di cibo, pesare 10 g di cibo solido o 10 ml di cibo liquido e inoculare una bottiglia con 100 ml di brodo tetrationato pronto per l'uso. Procedere come descritto sopra ma incubare a 37 ° C.
Come si può vedere, il rapporto tra il campione e il brodo sarà sempre 1:10.
I ceppi di controllo noti possono essere utilizzati per testare il terreno di coltura. I più utilizzati sono i ceppi certificati ATCC.
I ceppi da usare sono Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abbonda DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Si prevede uno sviluppo eccellente per i ceppi di Salmonella, intanto Escherichia coli può avere uno sviluppo debole o regolare e i ceppi Gram positivi (Enterococcus e Staphylococcus) sono parzialmente o totalmente inibiti.
-Poiché questo terreno non inibisce la crescita di Proteus, alcuni laboratori utilizzano per inserire 40 mg / L di novobiocina per evitare lo sviluppo di questo ceppo microbico. L'antibiotico deve essere aggiunto prima della soluzione di iodio iodio..
-Dopo aver preparato il terreno, inclusa la soluzione di iodio iodio, non dovrebbero essere necessarie più di 2 ore per essere inoculato..
-Quando si distribuisce il terreno nelle provette, la miscela deve essere continuamente omogeneizzata per risospendere il precipitato formatosi..
-In campioni meno contaminati, il brodo tetrationato viene incubato a 35-37 ° C e in campioni altamente contaminati si consiglia l'incubazione a 43 ° C..
Nessun utente ha ancora commentato questo articolo.