Fondotinta, preparazione e usi del brodo di lattosio

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David Holt

Il brodo di lattosio è un terreno di coltura liquido, non selettivo, utilizzato principalmente come terreno di pre-arricchimento nell'isolamento dei ceppi di Salmonella dall'analisi microbiologica effettuata su alimenti trasformati, prodotti lattiero-caseari o acqua. Questo è raccomandato dalla Commissione internazionale sulle specifiche microbiologiche per gli alimenti (ICMPF).

Il terreno contiene digest enzimatico di gelatina, estratto di carne e lattosio, sostanze necessarie per la crescita batterica. Inoltre il lattosio è un carboidrato fermentabile, quindi alcuni coliformi sono in grado di scomporlo con la produzione di gas..

Brodi lattati con torbidità. Fonte: foto scattata dall'autore MSc. Marielsa gil

Per questo motivo il brodo di lattosio è raccomandato dall'American Public Health Association (APHA) per lo studio presuntivo dei batteri coliformi totali e fecali, qualificandolo come un'ottima alternativa in sostituzione del brodo di triptosio lauril solfato nella tecnica standard del numero più probabile MPN).), Utilizzato per l'analisi microbiologica di campioni di acque reflue alimentari, latte e di superficie, sotterranee, ricreative, domestiche e industriali.

Indice articolo

  • 1 Razionale
  • 2 Preparazione
  • 3 usi
    • 3.1 Pre-arricchimento
    • 3.2 Analisi dei coliformi totali e fecali
  • 4 Controllo di qualità del mezzo
  • 5 Riferimenti

Base

Per l'analisi microbiologica di alcuni campioni, la fase di pre-arricchimento è essenziale per poter recuperare un microrganismo specifico che può trovarsi in quantità molto basse o in condizioni sfavorevoli che ne violano o riducono al minimo la sua vitalità..

È il caso degli alimenti essiccati e trasformati, possibilmente contaminati da Salmonellas sp. In questi casi, se i batteri sono presenti, hanno subito abusi fisici e chimici durante il processo di produzione del prodotto..

In modo tale che i microrganismi siano esposti a fattori avversi come la disidratazione, l'esposizione a prodotti inibitori o tossici e la sovrapposizione generata dalla presenza di altri batteri in quantità maggiore, tra gli altri..

In questo senso, il brodo di lattosio ha un effetto riparatore sulle strutture danneggiate del microrganismo, facendolo recuperare e riprodursi, in modo tale da poter essere rilevato.

Allo stesso modo, il brodo di lattosio ha la capacità di diluire le sostanze inibitorie che possono comprometterne la vitalità, consentendone lo sviluppo. Inoltre, la composizione nutrizionale del brodo di lattosio è strategica per favorirne la crescita Salmonella sp sopra altri microrganismi.

Per l'identificazione finale, sottocultura ad altri mezzi di coltura definitivi.

D'altra parte, la composizione del mezzo consente anche la rilevazione di microrganismi che fermentano il lattosio che producono gas..

Preparazione

Per preparare un litro di brodo di lattosio, pesare 13 grammi del terreno disidratato e sciogliere in 1000 ml di acqua distillata..

Per aiutare a sciogliere il terreno nell'acqua, la soluzione può essere riscaldata un po ', ma non troppo..

Una volta omogenea, la soluzione viene preparata come segue: se il brodo verrà utilizzato per la ricerca dei coliformi, si prepara un portaprovette, nel quale viene inserita capovolta una provetta di fermentazione Durham.

Il tubo di Durham è un dettaglio molto importante, perché permetterà la rilevazione della formazione di gas, un dato di grande valore nella ricerca dei coliformi.

Una volta pronte le provette, vengono versati 10 ml di brodo di latte, una quantità che deve essere sufficiente a coprire l'intera provetta Durham..

Se il brodo di lattosio deve essere utilizzato come brodo di pre-arricchimento, non è necessario posizionare una provetta di fermentazione Durham. In questo caso è necessaria una maggiore quantità di terreno (225 ml), che verrà servito in bottiglie da 500 ml, a bocca larga e con tappo a vite termoresistente..

Successivamente, le provette o le beute vengono sterilizzate in autoclave a 121 ° C per 15 minuti..

Il mezzo deve rimanere a un pH finale di 6,9 ± 0,2 a 25 ° C.

I brodi vanno conservati in frigorifero fino al momento dell'uso.

Prima dell'uso, i brodi devono essere portati a temperatura ambiente.

D'altra parte, il brodo di lattosio può essere preparato anche a doppia concentrazione..

Alcuni laboratori aggiungono il bromocresolo viola al brodo di lattosio come indicatore di pH, per mostrare le provette dove si è verificata la fermentazione del lattosio a causa del cambiamento di colore. In questo caso il brodo assume un colore violaceo e se c'è fermentazione diventa giallo.

Applicazioni

Nei laboratori di microbiologia, il brodo di lattosio è ampiamente utilizzato in quanto è un mezzo relativamente economico che offre risultati affidabili e rapidi (24-48 ore)..

Può essere utilizzato per l'analisi dei coliformi totali e fecali negli alimenti e nell'acqua o come brodo di pre-arricchimento per Salmonella.

Pre-arricchimento

Il pre-arricchimento è un passaggio prima dell'arricchimento del campione, che migliora notevolmente il recupero dei batteri del genere Salmonella negli alimenti trasformati..

Per fare ciò, il campione del cibo solido (25 grammi) o liquido (25 ml) viene seminato in 225 ml di brodo di lattosio, incubato per 24-48 ore. Successivamente, verrà sotto-coltivato in un terreno arricchito come il brodo di selenite cistina o il brodo tetrationato. Quindi passa ai supporti selettivi XLD e SS.

Analisi dei coliformi totali e fecali

È un ottimo mezzo come indicatore di contaminazione fecale.

Pertanto, il brodo di lattosio è ideale per la fase presuntiva dello studio dei coliformi con il metodo del numero più probabile..

Per campioni in cui si sospetta una grande quantità di coliformi, verrà inoculata una quantità minore (1 ml), mentre per campioni in cui si sospetta una quantità inferiore di coliformi verrà inoculato un volume maggiore di campioni (10 ml) ..

Per l'analisi si effettuano diluizioni 10-1, 10-Due, 10-3, formando una batteria di 3-5 tubi per ogni concentrazione utilizzata.

Da ogni diluizione, lo stesso volume viene seminato nei brodi di lattosio.

Le provette vengono incubate per 24 ore. I brodi negativi vengono incubati per altre 24 ore.

L'interpretazione dei risultati viene fatta osservando due caratteristiche: la prima è la presenza o l'assenza di torbidità e poiché questo mezzo non contiene un indicatore di pH, non ci sarà alcun cambiamento di colore..

Il secondo è la produzione o meno di gas. Il gas è facilmente evidenziato nel tubo di Durham dalla comparsa di una o più bolle d'aria all'interno..

È considerato positivo se si osservano entrambe le caratteristiche, cioè la torbidità con la produzione di gas. Le provette positive devono essere seminate nuovamente in terreni di conferma (brodo Brilliant Green Bile 2% e brodo EC).

Controllo di qualità del mezzo

- Quando si prepara il terreno, è importante non dimenticare di posizionare i tubi Durhams se lo scopo del tubo è quello di studiare i coliformi..

- Non surriscaldare il terreno prima della sterilizzazione.

- Distribuire in provette prima di sterilizzare, mai dopo.

- Non utilizzare se il terreno ha più di 3 mesi..

- Non utilizzare se si osservano cambiamenti nelle caratteristiche usuali del mezzo.

- Quando si prepara un lotto di brodo di lattosio, testare la qualità del lotto piantando ceppi noti come Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii Y Klebsiella pneumoniae. Crescono molto bene, con la produzione di gas (controllo positivo).

- Può anche includere Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, che crescono bene, ma senza produzione di gas (controllo negativo).

- Va notato che il colore originale del terreno disidratato è beige e quello del terreno preparato è giallo molto chiaro e trasparente. Se si osserva un cambiamento nel colore o nell'aspetto, potrebbe deteriorarsi..

Riferimenti

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologia e microbiologia ambientale. (2013) 1a edizione. Università di Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. (2009). Tecniche per l'analisi microbiologica degli alimenti. 2a ed. Facoltà di Chimica, UNAM. Messico.
  3. Laboratori Conda Pronadisa. 2017. Brodo di lattosio a doppia concentrazione (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Confronto delle tecniche per l'estrazione di batteri coliformi dal sedimento del lago Xochimilco, Messico. Rev. argent. microbiolo.  2013; 45 (3): 180-184. Disponibile su: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Determinazione della qualità microbiologica delle acque del pozzo artesiano dei distretti dei dipartimenti Centrale, Cordillera e Capitale. Mem. Inst. Investig. Scienza. Salute 2013; 11 (1): 5-14. Disponibile da: scielo.iics.

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